Buccutite PE抗体标记试剂盒 标记100ug抗体

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产品优势  

1.高效偶联：采用优化的偶联方法，确保染料和抗体的高效结合，减少未标记抗体和过度标记的情况

2.适用性广：可标记IgG、IgM、scFv等多种抗体类型

 

适用范围

主要用于标记抗体 

 

产品介绍

AAT Bioquest的Buccutite™快速PE抗体标记试剂盒提供了一种高效稳定便捷的PE-抗体偶联方案，内含预活化PE和反应缓冲液，所得偶联产物可应用于流式细胞术、蛋白印迹（WB）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及免疫组化（IHC）等检测。每盒可完成2次标记反应，每次最多可标记100 μg抗体。

我们的试剂盒提供预活化的PE，可高效偶联抗体及链霉亲和素等蛋白类二抗试剂。相较于SMCC的偶联工艺，我们的预活化染料可实现：1）更高的偶联产率；2）通过蛋白中丰富的氨基基团直接偶联（传统SMCC化学需依赖还原再生硫醇基团）

 

注意事项

1.由于PE分子量较大（240 kDa），每次标记反应中抗体的用量必须少于PE用量；

2.通常每100 μg PE对应50-60 μg IgG抗体时可获得最优效果，但是针对不同抗体，建议通过预实验确定最佳标记比例，；

实验方案概述

1.向抗体溶液（100 µL）中加入5 µL反应缓冲液（组分C）

2.将抗体溶液加入Buccutite™ MTA小瓶（组分B）中

3.室温孵育30分钟

4.与50 µL Buccutite™ FOL-Activated PE（组分A）混合

5.室温孵育60分钟

 

重要提示

试剂盒接收后需4°C保存。妥善保存条件下，试剂盒可稳定存放六个月。组分B可置于-20°C保存，但不得冷冻Buccutite™ FOL-Activated PE（组分A）和反应缓冲液（组分C）。使用前需将所有组分恢复至室温并短暂离心，开盖后应立即配制所需溶液。

 

实验方案

（以下方案以标记山羊抗小鼠IgG抗体为例）

 

工作液配制

抗体工作液

标记100 µg抗体（假设抗体浓度为1 mg/mL）时，将5 µL反应缓冲液（组分C，占总反应体积5%）与100 µL目标抗体溶液混合。

注1：若抗体浓度不同，需调整体积以确保反应体系中含约100 µg抗体。

注2：抗体应溶解于pH 7.2-7.4的1X PBS缓冲液中；若抗体存于甘氨酸缓冲液，需先透析至1X PBS（pH 7.2-7.4），或使用ReadiUse™ 10KD离心过滤器（AAT Bioquest #60502）去除游离胺类或铵盐（如硫酸铵、乙酸铵等沉淀抗体常用盐类）。

注3：含杂质或采用BSA/明胶稳定的抗体标记效果不佳。

注4：抗体浓度低于1 mg/mL时，与Buccutite™ MTA的反应效率显著降低。推荐抗体终浓度范围为1-10 mg/mL以获得最佳标记效率

 

操作步骤

1.抗体-Buccutite MTA反应

1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，通过反复吹吸或涡旋数秒混匀。

2.室温孵育抗体-Buccutite™ MTA混合液30-60分钟。

注意：如果需要，可延长抗体-Buccutite MTA反应混合物旋转或振荡孵育时间。

 

2.制备抗体-PE偶联物

1向Buccutite FOL活化的PE（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

2将整瓶Buccutite FOL活化的PE溶液加入纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合后室温旋转反应1小时。

3所得抗体-PE偶联物即可使用。

注意：立即使用时，抗体-PE偶联物需要用您选择的缓冲液稀释。

注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。

 

3. 抗体-PE偶联物保存

偶联物应以> 0.5 mg/mL浓度与载体蛋白（如0.1% BSA）共同保存。添加2 mM叠氮钠并避光条件下，4°C可稳定存放2个月。长期保存需冻干后置于≤ –20°C。