Buccutite APC-iFluor 700抗体标记试剂盒 标记25ug抗体

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产品优势  

高效偶联：采用优化的偶联方法，确保染料和抗体的高效结合，减少未标记抗体和过度标记的情况

 

适用范围

主要用于标记抗体 

 

产品介绍

APC-iFluor® 700 串联染料是APC-Alexa Fluor® 700 串联染料的替代品，因两者光谱几乎完全一致。在某些抗体上，我们的APC-iFluor® 700 串联染料比APC-Alexa Fluor® 700具有更高的荧光亮度（Stain Index）。AAT Bioquest 提供这款Buccutite™ 快速标记试剂盒，可轻松实现APC-iFluor® 700 串联染料与抗体、链霉亲和素及其他二抗偶联。

Buccutite™ APC-iFluor® 700 串联偶联试剂盒提供了一种稳定便捷的方法，用于将抗体与APC偶联。该试剂盒包含预活化的APC-iFluor® 700 串联染料及反应缓冲液，偶联后的抗体可应用于流式细胞术（Flow Cytometry）、Western Blot（WB）、ELISA 及免疫组化（IHC）。每盒可进行2 次标记反应，每次最多可标记25 μg 抗体。不同抗体的最佳标记比例需通过实验优化确定。

本试剂盒提供的预活化 APC-iFluor® 700 串联染料可快速与抗体、链霉亲和素等蛋白偶联，其偶联效率远高于传统繁琐的SMCC 化学偶联法。此外，我们的预活化染料通过蛋白氨基（-NH₂）进行偶联（蛋白中氨基含量丰富），而SMCC 化学法则依赖巯基（-SH）（需通过抗体还原再生），进一步提升了标记的便捷性和效率。

实验方案

1.向25 µl抗体溶液中加入1.25 µl反应缓冲液（组分C）

2.抗体混合液加入Buccutite™ MTA冻干粉（组分B）

3.室温孵育30分钟

4.加入50 µl Buccutite™ FOL活化APC-iFluor 700（组分A）

5.室温继续孵育60分钟

 

重要保存说明：

1.试剂盒需4℃保存（有效期6个月），组分B可-20℃冻存

2.禁止冷冻组分A（活化APC-iFluor 700）与组分C（反应缓冲液）

3.使用前需室温平衡所有组分，短暂离心后立即配制工作液

注：本方案以标记羊抗小鼠IgG抗体为例。

 

抗体工作液配制

抗体浓度1 mg/mL时

取25 μL抗体溶液（含25 μg抗体）加入1.25 μL反应缓冲液（组分C，占总反应体积5%）

 

注意事项

1.浓度调整：若抗体浓度≠1 mg/mL，需调整体积确保投入~25 μg抗体

2.抗体应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果抗体溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS，pH 7.2-7.4透析，或者使用ReadiUse™ 10KD离心过滤器（Cat. # 60502 from AAT Bioquest）去除游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）   

3.避免含BSA/明胶的抗体 

4.抗体浓度<1 mg/mL会显著降低Buccutite™ MTA反应效率

5.推荐工作浓度1-10 mg/mL

 

Buccutite™ MTA工作液配制

向Buccutite™ MTA（组分B）的小瓶中加入10 µLDMSO（DMSO,本品未提供）。

 

Buccutite™ FOL活化APC-iFluor 700工作液配制

向Buccutite™ FOL活化APC-iFluor 700（组分A）的小瓶中加入50 µL ddH2O

 

抗体-Buccutite™ MTA反应步骤

1.将抗体工作液直接加入Buccutite™ MTA（组分B）管中，通过反复吹吸或短暂涡旋（约5-10秒）充分混匀

2.室温（25±2℃）静置反应30-60分钟

注：可根据需求延长旋转或振荡孵育时间

 

抗体-APC-iFluor 700偶联制备

1.加入Buccutite™ FOL活化APC-iFluor 700工作液与抗体，通过过反复吸吹几次或漩涡振荡几秒钟来充分混合。

2.培养1-2小时

3.抗体-APC-iFluor 700偶联物现已准备好使用

注：如需立即使用，抗体-APC-iFluor 700偶联物需要稀释到您选择的缓冲液中。 

 

抗体-APC-iFluor 700偶联物保存

浓度要求：≥0.5 mg/mL（需添加0.1% BSA等载体蛋白）

短期保存：4℃避光（含2 mM叠氮钠可稳定2个月）

长期保存：冻干后≤-20℃储存

 

注意事项

避免反复冻融

使用前需离心去除潜在沉淀