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Buccutite APC抗体标记试剂盒 标记25ug抗体

英文名称:Buccutite™ Rapid APC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction*
产品参数
Ex (nm)651Em (nm)660
分子量-溶剂DMSO
存储条件在2-8度冷藏保存, 避免光照
产品概述

产品货期

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产品优势  

高效偶联:采用优化的偶联方法,确保染料和抗体的高效结合,减少未标记抗体和过度标记的情况

 

适用范围

主要用于标记抗体 

 

产品介绍

别藻蓝蛋白(APC)是一种红色荧光蛋白,其激发波长为651 nm,发射波长为662 nm。AAT Bioquest公司提供的Buccutite™快速标记试剂盒可高效实现APC与抗体及链霉亲和素等蛋白试剂的偶联。该Buccutite™ APC偶联试剂盒包含预活化APC和反应缓冲液,为抗体-APC偶联提供稳定便捷的解决方案,偶联产物可应用于流式细胞术、蛋白质印迹(WB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫组化(IHC)等检测。每盒试剂可完成2次标记反应,每次最多标记25μg抗体(具体抗体比例需通过实验优化)。该试剂盒采用预活化APC,相比传统的SMCC化学偶联法具有显著优势:1)即用型设计,偶联产率更高;2)通过蛋白质中丰富的氨基基团直接偶联(传统SMCC法需还原抗体再生巯基基团)。

实验方案

实验方案

1.向25 µl抗体溶液中加入1.25 µl反应缓冲液(组分C)

2.抗体混合液加入Buccutite™ MTA冻干粉(组分B)

3.室温孵育30分钟

4.加入50 µl Buccutite™ FOL活化APC(组分A)

5.室温继续孵育60分钟

 

重要保存说明:

1.试剂盒需4℃保存(有效期6个月),组分B可-20℃冻存

2.禁止冷冻组分A(活化APC)与组分C(反应缓冲液)

3.使用前需室温平衡所有组分,短暂离心后立即配制工作液

注:本方案以标记羊抗小鼠IgG抗体为例。

 

抗体工作液配制

抗体浓度1 mg/mL时

取25 μL抗体溶液(含25 μg抗体)加入1.25 μL反应缓冲液(组分C,占总反应体积5%)

 

注意事项

1.浓度调整:若抗体浓度≠1 mg/mL,需调整体积确保投入~25 μg抗体

2.抗体应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水(PBS),pH 7.2-7.4;如果抗体溶解在甘氨酸缓冲液中,必须用1X PBS,pH 7.2-7.4透析,或者使用ReadiUse™ 10KD离心过滤器(Cat. # 60502 from AAT Bioquest)去除游离胺或铵盐(如硫酸铵和乙酸铵)   

3.避免含BSA/明胶的抗体 

4.抗体浓度<1 mg/mL会显著降低Buccutite™ MTA反应效率

5.推荐工作浓度1-10 mg/mL

 

Buccutite™ MTA工作液配制

向Buccutite™ MTA(组分B)的小瓶中加入10 µLDMSO(DMSO,本品未提供)。

 

Buccutite™ FOL活化APC工作液配制

向Buccutite™ FOL活化APC(组分A)的小瓶中加入50 µL ddH2O

 

抗体-Buccutite™ MTA反应步骤

1.将抗体工作液直接加入Buccutite™ MTA(组分B)管中,通过反复吹吸或短暂涡旋(约5-10秒)充分混匀

2.室温(25±2℃)静置反应30-60分钟

注:可根据需求延长旋转或振荡孵育时间

 

抗体-APC偶联制备

1.加入Buccutite™ FOL活化APC工作液与抗体,通过过反复吸吹几次或漩涡振荡几秒钟来充分混合。

2.培养1-2小时

3.抗体-APC偶联物现已准备好使用

注:如需立即使用,抗体-APC偶联物需要稀释到您选择的缓冲液中。 

 

抗体-APC偶联物保存

浓度要求:≥0.5 mg/mL(需添加0.1% BSA等载体蛋白)

短期保存:4℃避光(含2 mM叠氮钠可稳定2个月)

长期保存:冻干后≤-20℃储存

 

注意事项

避免反复冻融

使用前需离心去除潜在沉淀