Amplite 荧光法锌离子定量试剂盒

Amplite 荧光法锌离子定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测锌离子的试剂盒，锌是一种必需的微量矿物质元素，在许多生物过程中发挥着重要作用。它是许多酶、蛋白质结构和基因表达控制所需的重要因素。锌状态还影响细胞分裂、生长、分化、发育和衰老的基本过程。缺锌的临床症状包括肢端皮炎、免疫力低下、腹泻、愈合不良、发育迟缓、性腺功能减退、胎儿生长障碍、畸形和流产。简单、直接和自动化的测量程序在研究和药物发现中是非常理想的。 AAT Bioquest 的 Amlite® 荧光锌定量试剂盒提供了一种使用我们专有的 Metaltel 检测生物样品中锌浓度的简单方法； Zn 520，其中锌与探针结合，荧光增强。锌探针对 Zn2+ 的荧光响应大幅增加（大于 200~300 倍）。它具有高 Zn2+ 特异性，对其他金属（包括 Ca2+、Mg2+、Mn2+ 和 Cu2+）几乎没有反应。该测定可用于血清、血浆和尿液等生物样品，检测灵敏度为 0.2 µM (13 ng/mL)。

Zn²⁺检测样品分析方案

概述

测试样品（50μL）或Zn²⁺

添加锌探针试剂50μL

在室温下孵育5-10分钟读取A610nm / A480nm的吸光度比

操作步骤

1.ZnCl₂标准品和试样制剂：

1.1将10μL的100mM ZnCl₂标准溶液（组分C）加入990L测定缓冲液（组分B）中，得到1mM ZnCl₂标准溶液。

1.2将10μL的1mM锌标准溶液（组分C）加入到990L测定缓冲液（组分B）中，得到100μMZnCl₂标准溶液。

1.3取300μL的100μMZnCl2标准溶液（来自步骤1.2）进行1：2连续稀释，得到50,25,12.5,6.25,3.13,1.56和0μM连续稀释的ZnCl2标准品。

1.4用测定缓冲液（组分B）将测试样品稀释至5-100μM范围。加入50μLZnCl2标准品，稀释样品并对照到每个孔中，如说明书中的表1和2所示。

2.运行锌测定：

2.1将25μLZn-620（组分A）加入5 mL测定缓冲液（组分B）中以制备Zn测定混合物。 向ZnCl₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLZn测定混合物（参见说明书中步骤1.5，表1和2）以使总ZnCl₂测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

2.2在室温下孵育反应5-10分钟，避光。

2.3用吸光度读板仪在610 nm和480 nm处检测吸光度的增加。

参考文献

After oxidation, zinc nanoparticles lose their ability to enhance responses to odorants
Authors: Samantha Hagerty, Yasmine Daniels, Melissa Singletary, Oleg Pustovyy, Ludmila Globa, William A MacCrehan, Shin Muramoto, Gheorghe Stan, June W Lau, Edward E Morrison
Journal: BioMetals (2016): 1--14

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