Amplite 荧光法黄嘌呤检测试剂盒

Amplite 荧光法黄嘌呤检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测黄嘌呤的试剂盒，黄嘌呤是在大多数人体组织和液体中发现的嘌呤碱。 许多兴奋剂来源于黄嘌呤，包括咖啡因，氨茶碱，IBMX，旁黄嘌呤，己酮可可碱，可可碱和茶碱，它们可以刺激心率，收缩力，高浓度的心律失常。 因此，检测生物样品中的黄嘌呤变化对于疾病诊断和监测是重要的。 Amplite 荧光黄嘌呤测定试剂盒为黄嘌呤的测量提供了快速且超灵敏的方法。 它可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式进行。 黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶存在下氧化成尿酸以释放过氧化氢，其可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 540nm / 590nm下用Amplite Red特别测量。 使用Amplite 荧光黄嘌呤测定试剂盒，在100μL反应体积中检测到低至0.4μM的黄嘌呤。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法黄嘌呤检测试剂盒。 

 

适用仪器

---

荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备黄嘌呤标准品或测试样品（50 µL）
2.添加黄嘌呤工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm时读取荧光强度

 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite Red底物储备液（250X）：
在Amplite Red底物（组分A）的小瓶中加入40 µL DMSO（组分F）。 注意：Amplite Red底物在硫醇（例如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇）的存在下不稳定。 反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10 µM。 由于Amplite Red在pH> 8.5时不稳定，因此应在pH 7-8（建议pH 7.4）下进行测定。

1.2 HRP储备溶液（500X）：
将100 µL测定缓冲液（组分B）加到辣根过氧化物酶（组分C）小瓶中。

1.3 黄嘌呤氧化酶（XO）储备溶液（100X）：
向小瓶黄嘌呤氧化酶（组分E）中加入100 µL测定缓冲液（组分B）制成黄嘌呤氧化酶（XO）储备液（100X）。

 

2.标准溶液配制

黄嘌呤标准品
将5 µL黄嘌呤标准品（组分D）添加到995 µL测定缓冲液（组分B）中，得到100 µM黄嘌呤标准溶液。 取200 µL 100 µM黄嘌呤标准溶液进行1：3连续稀释，以得到连续稀释的黄嘌呤标准液（X1-X7）。

 

3.工作溶液配制

将20μL的Amplite Red底物储备液（250X），10μL的HRP储备液（500X）和50μL的黄嘌呤氧化酶储备液（100X）加到5 mL的测定缓冲液（组分B）中，制成总体积 5.08毫升。 注意：避免直接暴露在光线下并立即使用。

 

样品操作及实验分析

表1.黑色壁/实心底部96孔微孔板中黄嘌呤标准品和测试样品的布局。 X =黄嘌呤标准品（X1-X7，0.137至100 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
X1	X1	...	...
X2	X2	...	...
X3	X3
X4	X4
X5	X5
X6	X6
X7	X7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
X1-X7	50ul	连续稀释（0.137至100 µM）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和表2提供的布局，准备黄嘌呤标准品（X），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.在黄嘌呤标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL黄嘌呤工作溶液，使总黄嘌呤测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在避光条件下，于室温下孵育反应30至60分钟。

4.使用酶标仪在激发= 530-570 nm（佳540 nm），发射= 590-600 nm（佳590 nm），截止= 570 nm的条件下监控荧光的增加。

 

参考文献

Concentration-dependent effect of sodium hypochlorite on stem cells of apical papilla survival and differentiation
Authors: Martin DE, De Almeida JF, Henry MA, Khaing ZZ, Schmidt CE, Teixeira FB, Diogenes A.
Journal: J Endod (2014): 51

Effect of hypochlorite oxidation on cholinesterase-inhibition assay of acetonitrile extracts from fruits and vegetables for monitoring traces of organophosphate pesticides
Authors: Kitamura K, Maruyama K, Hamano S, Kishi T, Kawakami T, Takahashi Y, Onodera S.
Journal: J Toxicol Sci (2014): 71

A simple yet effective chromogenic reagent for the rapid estimation of bromate and hypochlorite in drinking water
Authors: Zhang J, Yang X.
Journal: Analyst (2013): 434

Analysis of the germination kinetics of individual Bacillus subtilis spores treated with hydrogen peroxide or sodium hypochlorite
Authors: Setlow B, Yu J, Li YQ, Setlow P.
Journal: Lett Appl Microbiol (2013): 259

Comparative antimicrobial activities of aerosolized sodium hypochlorite, chlorine dioxide, and electrochemically activated solutions evaluated using a novel standardized assay
Authors: Thorn RM, Robinson GM, Reynolds DM.
Journal: Antimicrob Agents Chemother (2013): 2216

Effect of hypochlorite-based disinfectants on inactivation of murine norovirus and attempt to eliminate or prevent infection in mice by addition to drinking water
Authors: Takimoto K, Taharaguchi M, Sakai K, Takagi H, Tohya Y, Yamada YK.
Journal: Exp Anim (2013): 237

Green synthesis of carbon dots with down- and up-conversion fluorescent properties for sensitive detection of hypochlorite with a dual-readout assay
Authors: Yin B, Deng J, Peng X, Long Q, Zhao J, Lu Q, Chen Q, Li H, Tang H, Zhang Y, Yao S.
Journal: Analyst (2013): 6551

Use of pyrogallol red and pyranine as probes to evaluate antioxidant capacities towards hypochlorite
Authors: Perez-Cruz F, Cortes C, Atala E, Bohle P, Valenzuela F, Olea-Azar C, Speisky H, Aspee A, Lissi E, Lopez-Alarcon C, Bridi R.
Journal: Molecules (2013): 1638

A novel flow-injection analysis system for evaluation of antioxidants by using sodium dichloroisocyanurate as a source of hypochlorite anion
Authors: Ichiba H, Hanami K, Yagasaki K, Tanaka M, Ito H, Fukushima T.
Journal: Drug Discov Ther (2012): 44

Colorimetric determination of hypochlorite with unmodified gold nanoparticles through the oxidation of a stabilizer thiol compound
Authors: Zhang J, Wang X, Yang X.
Journal: Analyst (2012): 2806

 

相关产品

产品名称	货号
Amplite NAD检测试剂盒 （荧光法）蓝色荧光	Cat#15280
Amplite NADP检测试剂盒（荧光法）蓝色荧光	Cat#15281
Amplite 荧光法乙酰胆碱检测试剂盒 红色荧光	Cat#11403