Amplite 荧光法蛋白定量试剂盒 橙色荧光

Amplite 荧光法蛋白定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。蛋白质定量是蛋白质纯化，电泳，细胞生物学，分子生物学和其他研究应用中的重要任务。通常使用Biuret，Lowry，BCA和Bradford测定来估计蛋白质浓度。但是，这些比色测定法不太灵敏，并且需要大量样品以确保准确性。我们的Amplite 荧光蛋白定量试剂盒比现有的比色蛋白测量（例如Bradford和Bicinchoninic acid（BCA）测定）敏感得多。该试剂盒中使用的Prolite 橙在水溶液中不发荧光，但能快速与蛋白质反应并产生明亮的荧光。 Amplite 荧光蛋白定量试剂盒提供了一种定量分析溶液中蛋白质浓度的简单方法。只能检测到0.1μg/ mL的BSA。该试剂盒可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式进行。它可以在30分钟内完成，荧光信号易于在Ex / Em = 485/590 nm处监测。该试剂盒已被用于（1）研究蛋白质/蛋白质相互作用; （2）亲和层析后测量柱级分; （3）估计细胞提取物中膜蛋白的回收率;和（4）融合蛋白的高通量筛选。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法蛋白定量试剂盒。 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	485nm
Em：	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备Prolite 橙色工作溶液（50μL）
2.添加BSA标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30分钟
4.在Ex / Em = 485 / 590nm处读取荧光强度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
Protein Enhancer原液（500X）：
将100μL蛋白质增强缓冲液（组分E）加入到蛋白质增强剂（组分C）的小瓶中。 注意：20μL蛋白质增强剂原液（500X）足以制备10 mL工作溶液。 未使用的Protein Enhancer储备液（500X）应在-20 oC下以单次使用的等分试样储存。

2.标准溶液

BSA标准
注意：标准品和测试样品应在Protein Enhancer工作溶液中制备。

 

3.工作溶液

1.蛋白质增强剂工作溶液：
将20μL蛋白质增强剂储备溶液（500X）加入10 mL分析缓冲液（组分D）中并充分混合。

2. Prolite 橙色工作溶液：
将10μLProliteTM Orange（组分A）加入5mL测定缓冲液（组分D）中并充分混合。 注意：5 mL Prolite Orange工作溶液足以容纳1个平板。 为每个实验准备足够的Prolite 橙色工作溶液。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中BSA标准品和测试样品的布局。 BS = BSA标准（BS1-BS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
BS1	BS1	...	...
BS2	BS2	...	...
BS3	BS3
BS4	BS4
BS5	BS5
BS6	BS6
BS7	BS7

表2.每个孔的试剂组成

BSA标准	空白	测试样本
连续稀释：50μL	Protein Enhancer工作溶液：50μL	50 µL

 

蛋白质分析

1.将50μLBSA标准品，空白对照和测试样品（参见表1和2）加入到实心黑色96孔板中。 注意：对于384孔板，添加20μL样品。

2.将50μL/孔的Prolite Orange工作溶液加入BSA标准品，空白对照和测试样品中，使总测定体积为100μL/孔。 注意：对于384孔板，在每个孔中加入20μLProlite Orange工作溶液。

3.将反应在37℃孵育10至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 485 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

 

参考文献

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