Amplite 荧光法过亚硝酸盐定量检测试剂盒 绿色荧光
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
Amplite 荧光法过亚硝酸盐定量检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测亚硝酸盐的试剂盒，过氧亚硝酸盐（ONOO-）是强氧化物质和高活性硝化剂。过氧亚硝酸盐由超氧化物自由基与细胞内产生的一氧化氮之间的反应形成。 它可以破坏各种生物分子，包括蛋白质，酶，脂质和核酸，终导致细胞死亡。 由于其极短的半衰期和低稳态浓度，检测和量化溶液中的过氧亚硝酸盐一直是一项挑战。 为了满足这一需求，AAT Bioquest的Amplite 荧光过氧亚硝酸盐定量试剂盒提供了一种灵敏的工具来测量溶液中的ONOO-。 DAX-J2 PON Green 99与ONOO-反应生成亮绿色荧光产品。 它特异性地与ONOO-反应，对其他活性氧（ROS）和活性氮物质（RNS）具有高选择性。 该试剂盒可与荧光酶标仪和光谱仪配合使用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法过亚硝酸盐定量检测试剂盒 绿色荧光 。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 490 nm |
| Em： | 530 nm |
| Cutoff： | 515 nm |
| 推荐孔板: | 黑色孔板 |
样品实验方案
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.1 DAX-J2 PON Green 99储备溶液（500X）：
在DAX-J2 PON Green 99（组分A）的小瓶中加入20 µL DMSO（组分C），制成500X储备溶液。注意：20 µL的复配DAX-J2 PON Green 99储备溶液足以容纳1个板,远离光线。
1.2 过氧亚硝酸盐（ONOO）储备溶液（未提供）：
根据文献报道合成了过氧亚硝酸盐储备溶液。简而言之，用盐酸（0.6M）酸化亚硝酸钠（0.6M）和过氧化氢（0.7M）的混合物，并在1-2秒内加入氢氧化钠（1.5M）以使溶液呈碱性。使溶液通过短的二氧化锰柱除去过量的过氧化氢。过亚硝酸盐溶液在0.1 M NaOH中的消光系数在302 nm下为1670 M-1cm-1。 ONOO的储备溶液不稳定。我们强烈建议使其新鲜使用。
2.标准溶液
过氧亚硝酸盐标准
在测定缓冲液（组分B）中稀释过氧亚硝酸盐（ONOO）储备液，以得到20 µM ONOO 标准溶液，然后进行1：2连续稀释，以得到连续稀释的ONOO 标准溶液（O7-O1）。
3.工作溶液
将20μL的500X DAX-J2 PON Green 99储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中并充分混合。 注意：此分析混合物足以用于一个96孔板，避光。
样品操作及实验分析
表1.黑色96孔微孔板中ONOO标准品和测试样品的布局。 O = ONOO标准（O1-O7，0.313至20 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品
| BL | BL | TS | TS |
| O1 | O1 | ... | ... |
| O2 | O2 | ... | ... |
| O3 | O3 | ||
| O4 | O4 | ||
| O5 | O5 | ||
| O6 | O6 | ||
| O7 | O7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| O1-O7 | 50ul | 系列稀释液（0.313至20 µM） |
| BL | 50ul | 分析缓冲液 |
| TS | 50ul | 测试样品 |
1.根据表1和表2提供的布局，准备ONOO标准品（O），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
2.将50 µL工作溶液添加到ONOO标准，空白对照和测试样品的每个孔中，以使ONOO测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。
3.在避光条件下，于室温下孵育反应5至10分钟。
4.使用荧光板读数器监测Ex / Em = 490/530 nm（在515 nm处截止）的荧光增加。
参考文献
Branched-chain amino acids promote endothelial dysfunction through increased reactive oxygen species generation and inflammation
Authors: Olha Zhenyukh, Maria González-Amor, Raul R Rodrigues-Diez, Vanesa Esteban, Marta Ruiz-Ortega, Mercedes Salaices, Sebastian Mas, Ana M Briones, Jesus Egido
Journal: Journal of Cellular and Molecular Medicine (2018)
Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44--48
Gene silencing of endothelial von Willebrand Factor attenuates angiotensin II-induced endothelin-1 expression in porcine aortic endothelial cells
Authors: Anar Dushpanova, Silvia Agostini, Enrica Ciofini, Manuela Cabiati, Valentina Casieri, Marco Matteucci, Silvia Del Ry, Aldo Clerico, Sergio Berti, Vincenzo Lionetti
Journal: Scientific Reports (2016)
