Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 近红外荧光
| Ex (nm) | 648 | Em (nm) | 668 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比，过氧化酶也更便宜；其主要缺点是在保护剂（例如叠氮化钠）存在的条件下溶解性低；而在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite荧光法过氧化酶检测试剂盒 *近红外荧光* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析检测方案。本试剂盒使用Amplite IR，HRP近红外荧光底物。Amplite IR是过氧化酶的显色底物，它比H2O2和过氧化酶，及其它的过氧化酶的显色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的灵敏度。Amplite IR可产生在647 nm具有大吸收光，在670 nM处具有大激发光的底物，这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小，在600nm处几乎没有光吸收。本试剂盒可以用于ELISAs，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。本试剂盒经过优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收: | 647 ± 5nm |
| 推荐孔板: | 透明底板 |
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 640nm |
| Em: | 680nm |
| Cutoff: | 665nm |
| 推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备过氧化物酶工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.监测Ex / Em = 640/680 nm处的荧光强度（截止= 665 nm）
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Amplite IR过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite IR过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite IR过氧化物酶底物储备溶液。
1.2 HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中以制备20U / mL HRP标准溶液。
1.3 H2O2储备溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H2O2（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H2O2储备溶液。 注意：稀释的H2O2溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。
2.标准溶液
HRP标准
将15μL20U / mL HRP标准溶液加入985μL测定缓冲液（组分C）中，得到300 mU / mL HRP标准溶液（SD7）。 取300 mU / mL HRP标准溶液（SD7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6 - SD1）和分析缓冲液（组分C）。
3.工作溶液
将50μL的100X Amplite IR过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20mM H2O2储备溶液加入到4.9mL的测定缓冲液（组分C）中以制备过氧化物酶工作溶液,避光。
样品分析
表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.41至300mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| SD1 | SD1 | ... | ... |
| SD2 | SD2 | ... | ... |
| SD3 | SD3 | ||
| SD4 | SD4 | ||
| SD5 | SD5 | ||
| SD6 | SD6 | ||
| SD7 | SD7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| SD1-SD7 | 50ul | 连续稀释液（0.41至300 mU / mL） |
| BL | 50ul | 分析缓冲液（组分C） |
| TS | 50ul | 测试样本 |
1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。
2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL过氧化物酶工作溶液，使总过氧化物酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL过氧化物酶工作溶液，总体积为50μL/孔。
3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。
4.用荧光板读数器在激发= 600-650nm，发射= 650-690nm（佳Ex / Em = 640 / 680nm，截止= 665nm）监测荧光增加。 注意：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在647±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。
参考文献
Enzymatic oxidation of dipyridamole in homogeneous and micellar solutions in the horseradish peroxidase-hydrogen peroxide system
Authors: Almeida LE, Imasato H, Tabak M.
Journal: Biochim Biophys Acta (2006): 216
Horseradish peroxidase-driven fluorescent labeling of nanotubes with quantum dots
Authors: Didenko VV, Baskin DS.
Journal: Biotechniques (2006): 295
Recent advances in catalytic peroxidase histochemistry
Authors: Krieg R, Halbhuber KJ.
Journal: Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) (2003): 547
Vesicular transport route of horseradish C1a peroxidase is regulated by N- and C-terminal propeptides in tobacco cells
Authors: Matsui T, Nakayama H, Yoshida K, Shinmyo A.
Journal: Appl Microbiol Biotechnol (2003): 517
Development of a novel enzyme/prodrug combination for gene therapy of cancer: horseradish peroxidase/indole-3-acetic acid
Authors: Greco O, Folkes LK, Wardman P, Tozer GM, Dachs GU.
Journal: Cancer Gene Ther (2000): 1414
Preparation, morphological characterization, and activity of thin films of horseradish peroxidase
Authors: Vianello F, Zennaro L, Di Paolo ML, Rigo A, Malacarne C, Scarpa M.
Journal: Biotechnol Bioeng (2000): 488
Synthesis and purification of horseradish peroxidase-labeled oligonucleotides for tyramide-based fluorescence in situ hybridization
Authors: van Gijlswijk RP, van de Corput MP, Bezrookove V, Wiegant J, Tanke HJ, Raap AK.
Journal: Histochem Cell Biol (2000): 175
Evidence for free radical formation during the oxidation of 2'-7'-dichlorofluorescin to the fluorescent dye 2'-7'-dichlorofluorescein by horseradish peroxidase: possible implications for oxidative stress measurements
Authors: Rota C, Chignell CF, Mason RP.
Journal: Free Radic Biol Med (1999): 873
In situ identification of cyanobacteria with horseradish peroxidase-labeled, rRNA-targeted oligonucleotide probes
Authors: Schonhuber W, Zarda B, Eix S, Rippka R, Herdman M, Ludwig W, Amann R.
Journal: Appl Environ Microbiol (1999): 1259
Relative number of cells projecting from contralateral and ipsilateral nucleus isthmi to loci in the optic tectum is dependent on visuotopic location: horseradish peroxidase study in the leopard frog
Authors: Dudkin EA, Gruberg ER.
Journal: J Comp Neurol (1999): 212
相关产品
| 产品名称 | 货号 |
| Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 | Cat#11552 |
| Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒 | Cat#11551 |
| Amplite 发光法过氧化酶检测试剂盒 | Cat#11559 |
