Amplite 荧光法草酰乙酸检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法草酰乙酸检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测草酰乙酸的试剂盒，草酰乙酸是柠檬酸循环的重要组成部分，它与乙酰辅酶A反应生成柠檬酸盐。它还涉及糖异生，尿素循环，乙醛酸循环，氨基酸合成和脂肪酸合成。草酰乙酸的缺乏限制了糖原异生和尿素循环功能，并且可以导致能量产生减少。草酰乙酸也可用作血液谷氨酸剂，在创伤性脑损伤后提供神经保护，表现为海马神经元损失减少和神经功能。Amplite™荧光草酰乙酸检测试剂盒为生物样品中的草酰乙酸定量提供了灵敏的检测方法。草酰乙酸转化为丙酮酸，通过酶偶联反应产生过氧化氢。通过荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590nm下用Amplite™Red监测过氧化氢的产生。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法草酰乙酸检测试剂盒。 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

96孔板测定示例

概述

准备测试样品（50μL）和连续稀释的草酰乙酸标准品（50μL）

加入等体积的测定混合物（50μL）

在室温下孵育

监测荧光强度在Ex / Em = 540/590 nm

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备连续稀释的草酰乙酸标准品和测试样品：

1.1将100μLDdH2O加入草酰乙酸标准品（组分E）中，制成100mM草酰乙酸标准溶液。

1.2制备草酰乙酸标准稀释液：将10μL100mM草酰乙酸盐（来自步骤1.1）加入990μL测定缓冲液（组分C）中，得到1mM草酰乙酸溶液。 将100μL的1mM草酰乙酸标准溶液加入900μL测定缓冲液中以制备100μM草酰乙酸溶液。进行1：3连续稀释，得到约30,10,3,1,0.3和0.1μM连续稀释的草酰乙酸标准品。

1.3根据说明书中的表1，将50μL含草酰乙酸的样品和连续稀释的草酰乙酸盐标准品加入到固体黑色96孔微量培养板中。

 

2.准备草酰乙酸测定混合物：

2.1制作Amplite 红色底物原液（200X）：将50μLDMSO（组分F）加入Amplite Red底物（组分A）中，制成200X Amplite Red底物原液。

2.2制备草酰乙酸脱羧酶（OAC）储备溶液（100X）：将50μLddH 2 O加入草酰乙酸脱羧酶（组分D）中以制备100μL草酰乙酸脱羧酶原液。

2.3制备测定混合物：将5mL测定缓冲液（组分C）加入一个酶混合瓶（组分B）中充分混合。 将50μLOAC储备溶液（来自步骤2.2）和25μL200X Amplite Red储备溶液（来自步骤2.1）转移到瓶中并充分混合。

注意1：分析混合物不稳定，及时使用，避免直接暴露在光线下。

注意2：将未使用的200X Amplite Red原液储存在-20℃，避免光照和反复冻融循环。

 

3.运行草酰乙酸测定：

3.1将50μL测定混合物（来自步骤2.3）添加到草酰乙酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤1.3），以使总草酰乙酸测定体积为100μL/孔。

注1：对于384孔板，每孔加入25μL样品，25μLAssay混合液。

注2：在pH 6.5至7.0下进行草酰乙酸测定。

3.2在室温下孵育反应混合物30分钟至1小时。

3.3使用荧光板读数器在Ex / Em = 540 / 590nm（截止：570nm）监测荧光增加。

 

参考文献

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