Amplite 荧光法神经氨酸酶检测试剂盒 蓝色荧光

Amplite 荧光法神经氨酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于β-半乳糖苷酶的试剂盒，神经氨酸酶，也称为唾液酸酶，是糖苷水解酶，其催化末端唾液酸残基和神经氨酸的水解。常见的神经氨酸酶是病毒神经氨酸酶。唾液酸和邻近糖残基之间的连接的切割允许病毒通过粘蛋白转运并破坏宿主细胞上的血凝素受体，从而允许从感染细胞中洗脱后代病毒颗粒。神经氨酸酶促进感染细胞释放流感病毒，并促进病毒在呼吸道内传播。因此，它是流感开发的重要目标。神经氨酸酶的检测和筛选其抑制剂是研究生物过程和预防流感感染的重要任务之一。有一些检测试剂盒可用于检测神经氨酸酶，但所有商业上可用的试剂盒使用起来都很繁琐。我们的Amplite 荧光神经氨酸酶检测试剂盒提供灵敏且稳定的荧光测定法，可检测细胞或生物样品中存在的神经氨酸酶。在神经氨酸酶切割后，非荧光神经氨酸酶底物变为强荧光。该试剂盒可在100μL测定体积中检测低至0.3 mU / mL的神经氨酸酶。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化而无需分离步骤。荧光酶标仪在Ex / Em = ~320 / ~450nm处可以容易地读取信号。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法神经氨酸酶检测试剂盒。 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex：	320 nm
Em:	460 nm
Cutoff:	420 nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备神经氨酸酶工作溶液（50 µL）
2.加入神经氨酸酶标准品或测试样品（50 µL）
3.在37°C或室温下孵育1-2小时
4.监控Ex / Em = 320/460 nm（截止= 420 nm）的荧光增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 神经氨酸酶标准溶液（2U / mL）：
将50 µL ddH₂O加入小瓶神经氨酸酶标准品（组分C）中，制成约2 U / mL神经氨酸酶标准溶液。

1.2 FluLite 蓝色原液（200X）：
将50 µL ddH₂O加入FluLite Blue（组分A）小瓶中，制成200X储备溶液。

 

2.标准溶液

神经氨酸酶标准品
将10 µL的2 U / mL神经氨酸酶标准储备液加到990 µL的测定缓冲液（组分B）中，以生成20 mU / mL的神经氨酸酶标准品（NA7）。 取20 mU / mL神经氨酸酶标准溶液，并按1：2进行系列稀释，以使用分析缓冲液（组分B）获得系列稀释的神经氨酸酶标准品（NA6-NA1）。 注意：稀释的神经氨酸酶标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

 

3.工作溶液

3.1 0.3％β-巯基乙醇测定缓冲液：
将30 µLβ-巯基乙醇（组分F）添加到10 mL反应缓冲液（组分B）中，并充分混合。
注意：制备酶稀释缓冲液需要额外的缓冲液，用于生成标准曲线。

3.2 FDG工作方案：
将25 µL 1X FDG储备溶液加到5 mL的0.3％β-巯基乙醇测定缓冲液中。 注意：请勿将FDG溶液在室温下长时间放置，否则会发生自发水解。

3.3 裂解缓冲液工作液：
将25μL的200X FluLite 蓝色储备溶液添加到5 mL的测定缓冲液（组分B）中并充分混合以制备神经氨酸酶工作溶液。

 

样品操作及分析

表1.黑色固体96孔微孔板中神经氨酸酶标准品和测试样品的布局。 NA =神经氨酸酶标准品（NA1-NA7，0.312至20 mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
NA1	NA1	...	...
NA2	NA2	...	...
NA3	NA3
NA4	NA4
NA5	NA5
NA6	NA6
NA7	NA7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
NA1-NA7	50ul	连续稀释（0.312至20 mU / mL）
BL	50ul	空白对照
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局，准备神经氨酸酶标准品（NA），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.向神经氨酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50μL神经氨酸酶工作溶液，以使神经氨酸酶测定的总体积为100μL/孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL神经氨酸酶工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在避光的条件下，将反应在37°C或室温下孵育1至2小时。 注意：37°C孵育可获得更好的结果。

4.用荧光酶标仪监测在Ex / Em = 320/460 nm（截止= 420 nm）处的荧光增加。

 

参考文献

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