Amplite 荧光法单胺氧化酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法单胺氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的谷氨酸检测的试剂盒，单胺氧化酶（MAO）属于核黄素含氨氧化酶，它可以催化单氨的氧化。它存在于许多组织包括肝脏，肠粘膜和神经所含线粒体的外膜上。在人体内有两种类型的MAO：MAO-A和MAO-B。MAO-A在摄取的食物中单氨的代谢过程中非常重要。MAOs在神经递质失活过程扮演者主要角色。在抑郁症，精神分裂症，滥用，注意力不集中，偏头疼或者性早熟疾病中，都伴随着MAO的功能紊乱。Amplite单胺氧化酶检测试剂盒提供了一种快速超敏感的方法，来检测血液样本或者其他生物样本内的单胺氧化酶或者氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)的活性。该试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪（540／590nm）检测到或者被酶标仪（576nm）检测。Amplite 单胺氧化酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到10U／ml的单胺氧化酶。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法单胺氧化酶检测试剂盒。 

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适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.MAO标准品或测试样品（50μL）
2.添加MAO工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分F）加入到Amplite TM Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH7.4。

2. HRP股票解决方案（200X）：
将100μL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.血浆胺氧化酶（PAO）标准溶液（20 U / mL）：
将125μL测定缓冲液（组分B）加入等离子体胺氧化酶标准品（组分E）的小瓶中。

 

2.标准溶液

谷氨酸氧化酶标准
将30μL150mU/ mL GO标准溶液加入420μL测定缓冲液（组分B）中，得到10mU / mL GO标准溶液（GO7）。 取10 mU / mL GO标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的连续稀释的GO标准品（GO6-GO1）。

 

3.工作溶液

将20μLDelterite Red原液（250X），25μLHRP储备液（200X）和25μLMAO底物（组分D）加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为5.07 mL 单胺氧化酶（MAO）工作溶液,避光。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中PAO标准品和测试样品的布局。 PAO =血浆胺氧化酶标准品（PAO1-PAO7,1至1000mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
PAO1	PAO1	...	...
PAO2	PAO2	...	...
PAO3	PAO3
PAO4	PAO4
PAO5	PAO5
PAO6	PAO6
PAO7	PAO7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
PAO1-PAO7	50ul	连续稀释（1至1000 mU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	样品

1.根据表1和表2中提供的布局，将血浆胺氧化酶标准品（PAO），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔固体黑色微孔板中。对于384孔板，使用25每孔μL试剂代替50μL。

2.在PAO标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLMAO工作溶液，使总PAO测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLMAO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光强度。注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。然而，与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。

 

参考文献

An Increase in Plasma Homovanillic Acid with Cocoa Extract Consumption Is Associated with the Alleviation of Depressive Symptoms in Overweight or Obese Adults on an Energy Restricted Diet in a Randomized Controlled Trial
Authors: Idoia Ibero-Baraibar, Aurora Perez-Cornago, Maria J Ramirez, J Alfredo Martínez, M Angeles Zulet
Journal: The Journal of nutrition (2016): 897S--904S

 

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