Amplite 荧光法汞离子定量试剂盒

汞离子是一种必需的金属离子，在许多生物过程中起着重要作用。汞离子被认为是危险的污染物和高危险物质之一。Hg²⁺的高毒性是由于它对蛋白质，DNA和酶等生物配体中的硫醇基团具有高亲和力。当Hg²⁺在人体内被环境吸收时，它会引起微管，离子通道和线粒体的畸变，可能会对肾脏，心脏，大脑，胃，肠，神经系统和免疫系统造成严重损害。此外，汞在生态系统中通过食物链或大气积聚，并且由于其非生物降解而具有相对长的大气停留时间。由于各种原因，特别是其环境影响和生物并发症，已进行了深入研究。然而，很少有商业产品被开发用于快速检测汞离子。高选择性和灵敏的汞检测具有毒理学和环境重要性.Amplite 荧光汞离子定量试剂盒提供了一种强大的荧光测定方法，可高选择性地测量汞离子（Hg²⁺）。 Mercury Lite 590本身几乎不发荧光，但在结合Hg²⁺离子时会产生超过500倍的荧光增强。荧光信号可以用荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590nm下测量。使用该试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测到低至8μMHg²⁺。

Hg²⁺检测样品分析方案

概述

1.准备汞工作溶液（50μL）

2.添加汞（II）标准品或测试样品（50μL）

3.在室温下孵育20-30分钟

4.在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度重要事项为了获得佳效果，强烈建议使用黑色板。 在开始实验之前，在室温下解冻试剂盒组分

 

操作步骤

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。

 1.Mercury Lite 590原液（200X）：

将25μLDMSO加入到Mercury Lite 590（组分A）的小瓶中并充分混合，避光。

注意单次使用等分试样，并将未使用的200X Mercury Lite 590原液储存在-20℃，避免光照和重复冻融循环。

 

2.汞（II）标准储备液（未提供）：

我们使用高氯酸汞（II）水合物（Sigma 529656，CAS＃304656-34-6）作为汞（II）标准。在ddH 2 O中制备浓度为1mM的汞（II）储备溶液。

 

3.汞（II）标准液配制

使用ddH2O进行1：2连续稀释，得到约500,250,125,62.5，

31.3,15.6和7.8μM连续稀释的汞（II）标准品（M7-M1）。

 

4.工作溶液配制

将25μLMercuryLite™590原液添加到5 mL分析缓冲液（组分B）中并充分混合（组分A + B）。

注意这种汞工作溶液足以容纳一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

 

5.实验步骤

5.1根据表1和2中提供的布局准备和添加汞（II）标准品（M），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每个使用25μL试剂 而不是50μL。

5.2向每个汞（II）标准孔，空白对照和测试样品中加入50μL汞工作溶液，使总汞测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL汞工作溶液，总体积为50μL/孔。

5.3在室温下孵育反应20-30分钟，避光。

5.4用Ex / Em = 540 / 590nm，截止值570nm的荧光板读数器监测荧光增加。

 

参考文献

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