Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于ELISA检测的试剂盒，辣根过氧化物酶（HRP）是广泛用于多种生物学检测的小分子（MW~40KD）。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。它们按4：1的比例与抗体结合。此外，与其它酶标签相比HRP更便宜。Amplite荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA试剂盒 *红色荧光*含有所有分析必需组分，包括我们的Amplite Red HRP作为底物用于ELISA检测。本试剂盒提供优化分析方案，该方案可应用于高通量液体处理设备，能在微孔板中检出10pg的多抗。它的信号抗原用荧光分析仪读取Ex/Em = 530 to 570 nm/590 to 600 nm或者用酶标仪读取其570nm处的吸光值显示。作为检测试剂，它可以用来分析检测羊抗兔IgG。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒。 

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适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	576 ± 5nm
推荐孔板:	透明底板
荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备ELISA板
2.添加山羊抗兔IgG-HRP共轭工作液（100μL/孔）
3.在室温下孵育30分钟
4.清洗孔（PBS-Tween 3X）
5.加入过氧化物酶工作液（100μL/孔）
6.在室温下孵育30-60分钟
7.监测Ex / Em = 540/490 nm处的荧光强度（截止= 570 nm）

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色过氧化物酶底物储备液（200X）：
将250μLDMSO（组分D）加入到Amplite 红色过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中并充分混合以制备200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液。 注意：50μL的200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备液足以用于1个平板。 应立即使用原液,避光。

2. H₂O₂储备溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂储备溶液。 注意：稀释的H₂O₂储备溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

 

3.工作溶液

将50μL的200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液和100μL的20mM H₂O₂储备溶液加入9.85mL的测定缓冲液（组分C）中并充分混合以制备过氧化物酶工作溶液,避光。

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样品分析

1.准备ELLISA板：

1.1通过执行所有必要的ELISA制备步骤制备ELISA微量培养板（包括适当的对照）。

1.2将2μL山羊抗兔IgG-HRP缀合物（组分E）加入10mL含1％BSA的PBS（PBS-BSA，不包括在内）中以制备山羊抗兔IgG-HRP缀合物工作溶液。注意：10 mL山羊抗兔IgG-HRP结合物工作溶液足以用于1个平板。建议将此山羊抗兔IgG-HRP结合物工作溶液的浓度作为初始浓度进行尝试。每个特定应用的佳浓度可能需要凭经验确定。

1.3用含有0.02％至0.05％Tween 20（PBS-Tween）和排液的PBS洗涤ELISA孔三次。

1.4每孔加入100μL山羊抗兔IgG-HRP结合物工作液。

1.5在室温下孵育30分钟。排出山羊抗兔IgG-HRP结合物。

1.6用PBS-Tween洗涤孔三次并排干。

2.在ELISA板中运行过氧化物酶测定：

2.1在含有样品和对照的每个排出的微孔板中加入100μL过氧化物酶工作溶液。

2.2在室温下孵育反应30分钟或更长时间，避光。

2.3用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光增加。注意：也可以用吸光度酶标仪在576±5 nm的波长下读板。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

 

参考文献

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