Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒

Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测甘油的试剂盒，甘油3-磷酸（G3P）是糖酵解代谢途径中的重要中间体。动物，和植物使用G3P产生ATP。 它用于再生脑和骨骼肌细胞中的NAD +。 G3P与肥胖等脂质失衡疾病有关。 Amplite 甘油3磷酸盐检测试剂盒提供了量化G3P灵敏的方法之一。 该试剂盒使用Amplite Red底物来量化G3P浓度，其与G3P氧化酶介导的酶偶联反应中过氧化氢的产生成正比。 该试剂盒是与HTS应用兼容的优化“混合和读取”格式。 如图1所示，它在100μL溶液（0.41μM）内检测到低至41皮摩尔的G3P。该测定可以在没有分离步骤的方便的96孔或384孔微量滴定板格式中进行。 在Ex / Em =〜540/590 nm处使用荧光酶标仪可轻松读取其信号。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒。 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备G3P工作溶液（50 µL）
2.添加G3P标准品或测试样品（50 µL）
3.室温孵育10-30分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm时读取荧光强度

 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite Red底物储备液（200X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中，制成200X储备液。 避免暴露在光线下。

1.2 3-磷酸甘油（G3P）标准溶液（10 mM）：
将250 µL ddH₂O加到G3P标准品（组分D）的小瓶中，制成10 mM G3P标准品溶液。

 

2.标准溶液配制

G3P标准
将10 µL的10 mM G3P标准储备溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中，以生成100 µM的标准溶液（CS7）。 然后执行1：3的系列稀释，以得到系列稀释的G3P标准品（CS6-CS1）。 注意：稀释的G3P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

 

3.工作溶液配制

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到瓶酶混合液（组分B）中，并充分混合。

3.2 将25 µL Amplite Red底物储备液（200X）加入组分B和C的瓶子中，制成G3P工作溶液（组分A，B和C）。注意：请立即使用并远离光线。 注意：可以将组分B和组分C的未使用混合物分成单份使用，并保存在-20°C下。

 

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中G3P标准品和测试样品的布局。 CS = G3P标准（CS1-CS7，0.1至100 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
CS1	CS1	...	...
CS2	CS2	...	...
CS3	CS3
CS4	CS4
CS5	CS5
CS6	CS6
CS7	CS7

表2.每个单元的试剂组成

孔	容积	试剂
CS1-CS7	50ul	连续稀释（0.1至100 µM）
BL	50ul	分析缓冲液（组分C）
TS	50ul	样品

1.根据表1和表2提供的布局，将G3P标准品（CS），空白对照（BL）和测试样品（TS）准备到96孔黑色微孔板中。对于384孔板，请使用25 µL试剂 每孔而不是50 µL。

2.在G3P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G3P工作溶液，以使G3P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在避光条件下，于室温下孵育反应10至30分钟。

4.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm（在570 nm截止）处监测荧光的增加。

 

参考文献

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Rickettsia prowazekii uses an sn-glycerol-3-phosphate dehydrogenase and a novel dihydroxyacetone phosphate transport system to supply triose phosphate for phospholipid biosynthesis
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Design and synthesis of small molecule glycerol 3-phosphate acyltransferase inhibitors
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Aging and acyl-CoA binding protein alter mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase activity
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