Amplite 荧光法谷胱甘肽检测试剂盒 绿色荧光

Amplite 荧光法谷氨酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测谷氨酸的试剂盒，物系统中半胱氨酸的试剂和试剂盒很少，并且在为数不多的商业化半胱氨酸检测试剂盒中存在灵敏度较低、操作较冗长等缺点。Amplite荧光法谷胱甘肽分析试剂盒 *绿色荧光*对样品中谷胱甘肽提供超敏感实验用于定量。这个试剂盒利用专有的无荧光染料通过与硫醇反应产生强荧光。本试剂盒提供敏感的一步荧光方法，并且在100 ul检测体积中能检测到1pmol的半胱氨酸或者谷胱甘肽。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽检测试剂盒。 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em：	590nm
cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备GSH工作溶液（50μL）
2.添加GSH标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10至60分钟
4.检测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加（cut off= 515 nm）

 

溶液制备

1.储备溶液

1.1 GSH标准溶液（1 mM）：
将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液。

1.2 Thiolite Green原液（100X）：
将100μLDMSO（组分D）加入到Thiolite Green（组分A）的小瓶中以制备100X Thiolite Green原液。

 

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

将30μL的1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液加入到970μL的测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol /μL）GSH标准溶液。 取30μM（30 pmol /μL）GSH标准溶液，进行1：3连续稀释，得到用分析缓冲液（组分B）连续稀释的GSH标准品（SD7-SD1）。 注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

 

3.工作溶液

将50μL 100XThiolite Green原液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成GSH工作溶液。

点击查看细胞样品制备指南

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中GSH标准品和测试样品的布局。 SD = GSH标准品（SD1  -  SD7,0.01至10μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	...	...
SD2	SD2	...	...
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释液（0.01至10μM）
BL	50ul	分析缓冲液
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备GSH标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：根据需要处理细胞或组织样本。

2.在GSH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGSH工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGSH工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至60分钟，避光。

4.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下检测荧光增加。

 

参考文献

Comparison of different methods to study effects of silver nanoparticles on the pro-and antioxidant status of human keratinocytes and fibroblasts
Authors: Sebastian Ahlberg, Fiorenza Rancan, Matthias Epple, Kateryna Loza, David Höppe, Jürgen Lademann, Annika Vogt, Burkhard Kleuser, Christian Gerecke, Martina C Meinke
Journal: Methods (2016)

 

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