Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 红色荧光
| Ex (nm) | 592 | Em (nm) | 609 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸酶的试剂盒，碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA 或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端，并生成一分子的有机基团和一分子的无机磷酸。碱性磷酸酶不是单一的酶，而是一组同功酶。碱性磷酸酶在ELISA、免疫组化，Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的灵敏度。它广泛地用于多种生物学分析（特别是免疫分析）和基于ELISA的疾病诊断。Amplite 荧光法碱性磷酸酶分析试剂盒 *红色荧光* 利用磷酸酶SunRed红色荧光底物的特性，来定量检测溶液中、细胞抽提液，固相物质表面（例如PVDF膜）的碱性磷酸酶活性。这种磷酸酶荧光底物在磷酸酶催化下产生的荧光产物具有强烈的红色荧光。本试剂盒提供所有必需组分，包括我们佳的产品组合和分析方法，并且与可用于HTS（高通量筛选）。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 620nm |
| Em: | 660nm |
| Cutoff: | 630nm |
| 推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温或37°C孵育30至120分钟
4.监测Ex / Em = 620/660 nm处的荧光强度（截止= 630 nm）
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 SunRed 底物储备液（250X）：
将100μL双无菌H2O加入到SunRed 底物（组分A）的小瓶中，制备250X SunRed 底物储备溶液。 应立即使用原液。
1.2碱性磷酸酶标准溶液（100 U / mL）：
添加100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位），以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。 注意：碱性磷酸酶标准溶液不稳定。
2.标准溶液
碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 取1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液，进行1：3连续稀释，得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品（AS7-AS1）和H2O-0.1％BSA。
3.工作溶液
对于一个96孔板，将20μL250XSunRed 底物储备溶液加入到5 mL分析缓冲液（组分B）中并充分混合以制备碱性磷酸酶工作溶液。 注意：避免光照并为每个实验准备新鲜的反应混合物。
样品操作及分析
表1.碱性磷酸酶标准品和实心黑色96孔微孔板中的测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.3至300 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| AS1 | AS1 | ... | ... |
| AS2 | AS2 | ... | ... |
| AS3 | AS3 | ||
| AS4 | AS4 | ||
| AS5 | AS5 | ||
| AS6 | AS6 | ||
| AS7 | AS7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| AS1-AS7 | 50ul | 连续稀释（0.3至300 mU / mL） |
| BL | 50ul | H2O - 0.1% BSA |
| TS | 50ul | 测试样本 |
1.在上清液中进行碱性磷酸酶测定：
1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。
1.2向碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL碱性磷酸酶工作溶液，使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL碱性磷酸酶工作溶液，总体积为50μL/孔。
1.3在所需温度下将反应温育30至120分钟，避光。
1.4用Ex / Em = 620 / 660nm（截止值= 630nm）的荧光板读数器监测荧光增加。
2.在细胞中运行碱性磷酸酶测定：
2.1根据需要处理细胞。
2.2从细胞板中完全除去生长培养基。 注意：由于生长培养基与SunRed™底物的干扰，重要的是从细胞板中完全除去生长培养基。
2.3用5mL蒸馏水将1mL稀释的5mL碱性磷酸酶工作溶液稀释。
2.4向每个细胞孔中加入100μL（96孔板）或50μL（384孔板）的1：1稀释的碱性磷酸酶工作溶液。
2.5在所需温度下孵育反应30至60分钟，避光。
2.6用Ex / Em = 620 / 660nm（截止值= 630nm）的荧光板读数器监测荧光增加。
参考文献
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