Amplite 荧光法醛类定量试剂盒

Amplite 荧光法醛类定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。快速地检测醛类在生物学研究、食品工业、化学研究和环境污染监督中都是一项非常重要的任务。有许多试剂和试剂盒都可以用来定量分析总醛含量。现存的醛类检测法大都基于分离法，如HPLC-MS 或者GC-MS，这种方案成本昂贵、操作繁杂，不适合高通量及经济型的检测要求。Amplite比色法醛类定量检测试剂盒使用独特的染料，该染料与醛反应后形成荧光产物。本试剂盒提供灵敏的一步法醛类检测，检测灵敏，可检测 100 µL 测定体积 (1 µM) 中低至 0.1 纳摩尔的醛。试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何额外步骤，就可以轻易地实现自动化。终反应信号可通过酶标仪在405或者550nm处方便地读取。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法醛类定量试剂盒。 注：该探针会与硫醇发生反应，如果样品含有硫醇，请用 2-5 mM H2O2 处理样品（包括对照）30 分钟。然后进行测定。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	365nm
Em：	435nm
cutoff:	420nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备酶反应溶液（50μL）
2.添加AldeLight 蓝色工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育15至30分钟
4.加入25μL反应缓冲液
5.监测Ex / Em = 365 / 435nm处的荧光增加

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。

1.1 AldeLight Blue原液（250X）：
将40μLDMSO（组分E）加入AldeLight™Blue（组分A）小瓶中，制成250X AldeLight™Blue原液。

1.2 醛标准溶液（10 mM）：
将ddH2O加入到小瓶标准品（组分D）中以制备10mM醛标准溶液。

 

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

取 10 mM 醛标准溶液，用 ddH2O 进行 1:10 稀释，得到 1000 uM 醛标准溶液 (AS7)。然后进行 1:3 连续稀释以获得剩余的醛标准品 (AS6 - AS1)。

 

3.工作溶液

将20μL250XAldeLight Blue原液添加到5 mL分析缓冲液（组分B）中，并充分混合以制备AldeLight Blue工作溶液。 注意：对于一个板，5 mL AldeLight Blue工作溶液就足够了。 反应混合物不稳定，好在2小时内使用。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中的醛标准品和测试样品的布局。 AS =醛标准品（AS1  -  AS7,1至1000μM）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（1至1000μM）
BL	50ul	ddH2O
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备醛标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

注：该探针会与硫醇发生反应，如果样品含有硫醇，请用 2-5 mM H2O2 处理样品（包括对照）30 分钟。然后进行测定。

2.在醛标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLAldeLight Blue工作溶液，使总醛测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLAldeLight Blue工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在室温下孵育15至30分钟，避光。

4.每孔加入25μL反应缓冲液（组分C）。

5.使用荧光板读数器监测Ex / Em = 365 / 435nm处的荧光增加。

 

参考文献

Biological Activity of Peptide-conjugated Polyion Complex Matrices Consisting of Alginate and Chitosan
Authors: Chikara Fujimori, Jun Kumai, Kyotaro Nakamura, Yingzi Gu, Fumihiko Katagiri, Kentaro Hozumi, Yamato Kikkawa, Motoyoshi Nomizu
Journal: Peptide Science (2016)

Hepatic Deficiency of Augmenter of Liver Regeneration Exacerbates Alcohol-Induced Liver Injury and Promotes Fibrosis in Mice
Authors: Sudhir Kumar, Jiang Wang, Richa Rani, Chandrashekhar R Gandhi
Journal: PloS one (2016): e0147864

Integrated self-assembling drug delivery system possessing dual responsive and active targeting for orthotopic ovarian cancer theranostics
Authors: Chun-Jui Lin, Chen-Hsiang Kuan, Li-Wen Wang, Hsi-Chin Wu, Yunching Chen, Chien-Wen Chang, Rih-Yang Huang, Tzu-Wei Wang
Journal: Biomaterials (2016): 12--26

Fiber-optic protease sensor based on the degradation of thin gelatin films
Authors: Bastien Schyrr, Stéphanie Boder-Pasche, Réal Ischer, Rita Smajda, Guy Voirin
Journal: Sensing and Bio-Sensing Research (2015): 65--73

 

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