Amplite 比色法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒
| Ex (nm) | 571 | Em (nm) | 584 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
Amplite 比色法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于黄嘌呤的试剂盒,黄嘌呤氧化酶（XO）是一种催化次黄嘌呤氧化成黄嘌呤的酶，可以进一步催化黄嘌呤氧化成尿酸。它在嘌呤的分解代谢中起重要作用。黄嘌呤氧化酶通常存在于肝脏和空肠中。在严重肝损伤期间，黄嘌呤氧化酶被释放到血液中，因此XO的血液测定是确定肝脏损伤是否已经发生的一种方法。Amplite 比色黄嘌呤氧化酶检测试剂盒为黄嘌呤氧化酶活性的测量提供了一种快速，超灵敏的方法。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。在该测定中，黄嘌呤氧化酶催化嘌呤碱基，次黄嘌呤或黄嘌呤氧化成尿酸和超氧化物，其自发降解为过氧化氢（H2O2）。该试剂盒使用我们的Amplite Red基板，使用吸光度酶标仪可以在~570 nm处轻松读取颜色信号。使用Amplite 比色黄嘌呤氧化酶检测试剂盒，我们在100μL反应体积中检测到低至0.3 mU / mL的黄嘌呤氧化酶。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法黄嘌呤氧化酶检测试剂盒。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收: | 570/610nm |
| 推荐孔板: | 透明孔板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备并添加XO标准品和/或测试样品（50μL）
2.准备并添加XO Assay工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在OD比为570 / 610nm时读取吸光度增加
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分F）加入到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。注意：避免反复冻融循环。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的分析缓冲液（pH 7.4）。
1.2 HRP库存解决方案（500X）：
将100μL测定缓冲液（组分B）加入HRP小瓶（组分C）中。注意：未使用的HRP储备溶液（500X）应分成一次性使用的等分试样并储存在-20 oC。
1.3 黄嘌呤氧化酶（XO）原液：
将200μL测定缓冲液（组分B）加入黄嘌呤氧化酶标准品（组分E）的小瓶中。注意：未使用的XO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20ºC。
2.标准溶液
黄嘌呤氧化酶标准
将10μL1U/ mL XO储备液加入990μL分析缓冲液（组分B）中，制成10 mU / mL XO标准溶液。进行1：3连续稀释，得到约10,3,1,0.3,0.1， 0.03,0.01和0mU / mL连续稀释的XO标准品。
3.工作溶液
表1.一个透明底96孔微孔板的XO分析工作溶液（2X）
| 成分 | 规格 |
| Amplite 红色储备液（250x） | 20ul |
| HRP（500X） | 10ul |
| 黄嘌呤（100X） | 50ul |
| 分析缓冲液 | 5ml |
| 总容积 | 5.08ml |
样品分析
表2.在透明底96孔微孔板中的黄嘌呤氧化酶标准品和测试样品的布局。 XOS =黄嘌呤氧化酶标准品（XOS1-XOS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| XOS1 | XOS1 | ... | ... |
| XOS2 | XOS2 | ... | ... |
| XOS3 | XOS3 | ||
| XOS4 | XOS4 | ||
| XOS5 | XOS5 | ||
| XOS6 | XOS6 | ||
| XOS7 | XOS7 |
表3.每个孔的试剂组成
| XO标准 | 空白 | 测试样本 |
| 连续稀释：50μL | 测定缓冲液（化合物B）：50μL | 50 µL |
注意：黄嘌呤氧化酶标准仅用于阳性对照，不应作为酶活性的定量标准。
1.如表2和3中所述，将XO标准品和含有XO的测试样品加入白色透明底部微孔板中。
2.将50μLXOAssay工作溶液加入XO标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（表2），使总XO测定体积为100μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。
3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。
4.用吸光度读数器监测信号强度，OD比为570 / 610nm。
参考文献
Xanthine oxidoreductase regulates macrophage IL1β secretion upon NLRP3 inflammasome activation
Authors: Annette Ives, Johji Nomura, Fabio Martinon, Thierry Roger, Didier LeRoy, Jeffrey N Miner, Gregoire Simon, Nathalie Busso, Alexander So
Journal: Nature communications (2015)
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