Amplite 比色法丙酮酸检测试剂盒

Amplite 比色法丙酮酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙酮酸的试剂盒，丙酮酸是细胞内代谢途径中的重要化合物。它来源于称为糖酵解的葡萄糖代谢。一分子葡萄糖分解成两个丙酮酸分子，通过两种方式之一提供活细胞能量。当氧气存在时（有氧呼吸），丙酮酸被丙酮酸脱氢酶转化为乙酰-CoA，丙酮酸脱氢酶进入柠檬酸循环（也称为三羧酸循环）产生ATP。当氧气不足时，丙酮酸盐会厌氧分解，在动物体内产生乳酸盐，在植物和微生物体内产生乙醇。丙酮酸盐的异常水平或乳酸盐与丙酮酸盐的浓度比可能与肝脏疾病或代谢紊乱有关，并且是患者临床和其他实验室研究中的一种诊断测量。 AAT Bioquest的Amplite 荧光丙酮酸盐检测试剂盒提供了一种灵敏的荧光检测方法，用于量化生物样品中的丙酮酸盐。它利用释放过氧化氢的酶偶联反应，可以在Ex / Em = 540 / 590nm处通过荧光酶标仪中的丙酮酸盐传感器检测。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法丙酮酸检测试剂盒。 

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	575nm
推荐孔板:	透明底板

样品实验方案

简要概述

1.准备样品以及连续稀释的丙酮酸标准溶液（50 µL）
2.加入等体积的工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm处的吸光度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor 丙酮酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液。

 

2.标准溶液

丙酮酸标准
将2μL100 mM丙酮酸盐（组分D）添加到998μLPBS（pH 7.0）中，得到200μM丙酮酸盐标准溶液（PS7）。 然后执行1：2的系列稀释，以得到剩余的系列稀释的丙酮酸标准品（PS6-PS1）。

 

3.工作溶液

将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一个Enzyme Mix1瓶（组分B1）中，并充分混合。 将100μLddH2O加入一个Enzyme Mix2小瓶（组分B2）中并充分混合。 将整个小瓶的Enzyme Mix2（100μL）和25 uL的200X丙酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix1瓶中并充分混合。 注意：立即使用，避免直接暴露在光线下。

 

样品操作及实验分析

表1.白色透明96孔微孔板中丙酮酸标准溶液和测试样品的布局。 PS =丙酮酸标准溶液（PS1- PS7，3.125至200 µM），BL =空白对照（PBS），TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
PS1	PS1	...	...
PS2	PS2	...	...
PS3	PS3
PS4	PS4
PS5	PS5
PS6	PS6
PS7	PS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
PS1-PS7	50ul	连续稀释液（3.125至200 µM）
BL	50ul	PBS
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局，准备丙酮酸标准品（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.在丙酮酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL工作溶液，使丙酮酸测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下进行丙酮酸测定。

3.将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm处监测吸光度的增加。

 

参考文献

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