Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒

Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测乳酸的试剂盒，乳酸是手性的并且具有两种光学异构体：L-乳酸和D-乳酸。在代谢和运动过程中，乳酸盐通过乳酸脱氢酶（LDH）不断从丙酮酸产生。 监测乳酸水平是评估组织需氧量和利用率之间平衡的好方法，在研究细胞和动物生理学时非常有用。D-乳酸不被哺乳动物代谢，其从体内主要取决于肾脏排泄。D-和L-乳酸存在于许多发酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉类和鱼类。D-和L-乳酸含量是食品的质量指标，如鸡蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。血液中异常高浓度的D-乳酸通常是胃肠道中过度生长的反映。

AAT Bioquest的Amplite 乳酸盐检测试剂盒（L＃乳酸检测Cat＃13814和13815，D-lactate检测Cat＃13810和13811）提供荧光和吸光度检测方法，用于检测L-乳酸盐或D-乳酸盐。生物样品，如血清，血浆，尿液，以及细胞培养样品。在酶偶联测定中，乳酸与NADH成比例相关，其通过生色NADH传感器特异性监测。通过吸光度酶标仪在~575nm或~55075nm / A605nm的吸光度比下可以容易地读取信号，以提高测定灵敏度。使用此Colorimetric Amplite L-乳酸测定试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测到低至4μM的L-乳酸。它应用广泛，可以很容易地适用于需要测量L-乳酸的各种应用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒。

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	575/605nm
推荐孔板:	透明底板

96孔板测定示例

概述

制备L-乳酸测定混合物（50μL）

加入L-乳酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

 

操作方法

1.准备NAD储备溶液（100X）：

向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100×NAD储备溶液。

 

2.准备L-乳酸盐储备液：

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入L-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：未使用的L-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

3.准备L-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：

3.1将10μLL-乳酸盐储备液（来自步骤2）加入990L PBS缓冲液中，以产生1mM L-乳酸盐标准溶液。

注意：稀释的L-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM L-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到L-Lactate标准品的300,100,30,10,3,1和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2中所述，将L-乳酸盐标准品和含L-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微孔板中。

 

4.制备L-乳酸测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中。

4.2将50μLNAD储备溶液（100X，来自步骤1）加入到组分A的瓶子中（来自步骤4.1），并充分混合。

注意：这种L-乳酸盐测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的L-乳酸盐测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

5.运行L-乳酸测定：

5.1将50μLL-乳酸盐测定混合物（来自步骤4.2）添加至L-乳酸盐标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中以使得总L-乳酸盐测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，在每个孔中加入25μL样品和25μLL-乳酸盐测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。

 

参考文献

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