Amplite 比色法D-乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒

Amplite 比色法D-乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测LDH的试剂盒，乳酸脱氢酶（LDH ）是一种氧化还原酶，其催化丙酮酸和乳酸的相互转换。 LDH存在于各种各样的生物体，包括动物和植物的细胞质中。细胞组织的损伤或红细胞溶血后释放的LDH进入血液。因为LDH是相当稳定的酶，它已被广泛地用于评价损伤组织和细胞毒性的存在。乳酸脱氢酶的定量具有广阔的应用范围。 Amplite 乳酸脱氢酶测定试剂盒提供用于生物样品，如血清，血浆，以及细胞培养物的样品中检测到D-乳酸脱氢酶（D- LDH）基于荧光的方法。在酶偶联法中 LDH与NADH是专门由NADH的荧光传感器监测比例浓度。这个实验是具体的D-乳酸脱氢酶。荧光信号可以通过荧光酶标仪在575 nm处读出。有了这个Amplite D-乳酸脱氢酶测定试剂盒，我们能够探测到低至 3 mU/mL的D-乳酸脱氢酶在100 μL的反应体积。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法D-乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒。 

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	575/605nm
推荐孔板:	透明底板

样品实验方案

简要概述

1.准备D-乳酸脱氢酶工作溶液（50 µL）
2.加入D-乳酸脱氢酶标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测在A575nm / A605nm处的吸光度比增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NAD储备溶液（100X）：
将100 µL H2O加入NAD小瓶（组分C）中，制成100X NAD储备溶液。

1.2 D-LDH标准溶液（100 U / mL）：
将100 µL H2O或1x PBS缓冲液加到D-LDH标准溶液（组分D）的小瓶中，制成100 U / mL D-LDH标准溶液。

 

2.标准溶液

D-LDH标准
将10 µL 100X D-LDH标准溶液加到990 µL 1x PBS缓冲液中，以生成1000 mU / mL D-LDH标准溶液。 取1000 mU / mL D-LDH标准溶液，并在PBS中进行1：3的系列稀释，以得到D-LDH标准品（SD7-SD1）的系列稀释液。 注意：稀释的D-LDH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

 

3.工作溶液

3.1 将10 mL测定缓冲液（组分B）添加到瓶中的酶探针（组分A）中，制成酶探针混合物。 注意：此酶探针混合物足以容纳两个96孔板。 它在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，并避免暴露在光线下。 或者，可以通过将200 µL H2O加入组分A的瓶子中制成50倍的D-LDH酶混合储备液，然后通过将储备液与测定缓冲液（组分B）混合并制备D-LDH工作溶液。 按比例的100倍NAD解决方案。

3.2 将50 µL 100X NAD储备溶液添加到5 mL酶探针混合物中，并充分混合以制成D-LDH工作溶液。 注意：此D-LDH工作溶液足以用于一个96孔板。 它不稳定-足以进行一个实验并立即使用。

 

样品操作及实验分析

表1.白色/透明底部96孔微孔板中D-LDH标准品和测试样品的布局。 SD = D-LDH标准品（SD1-SDH7，0.3至300 mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	...	...
SD2	SD2	...	...
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释液（0.3至300 mU / mL）
BL	50ul	稀释缓冲液
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和表2提供的布局，准备D-LDH标准品（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL D-LDH工作溶液添加到D-LDH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使D-LDH测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL D-LDH工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至2小时。

4.使用酶标仪在A575nm / A605nm处监测吸光度的增加。

 

参考文献

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