Amplite 比色法钙离子定量试剂盒*蓝色*
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
Amplite 比色法钙离子定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于钙离子定量的试剂盒，钙对所有生物体都是必不可少的，特别是在细胞生理学中，钙离子Ca2+进出细胞质的运动是许多细胞过程的信号。钙是人体中质量第五丰富的元素，它是一种具有许多功能的常见细胞离子信使，也可作为骨骼中的结构元素。钙在调节血管收缩和舒张，神经冲动传递，肌肉收缩和激素分泌中起重要作用。钙的血清水平在人体内的相当有限的范围（9至10.5mg / dL）内受到严密调节。低钙血症和高钙血症都是严重的医学疾病。低钙水平的原因包括慢性肾功能衰竭，维生素D缺乏和严重酒精中毒可能发生的低血镁水平。 Amplite 钙检测试剂盒提供了一种在生理溶液中检测钙的简单方法。该试剂盒使用我们的Calcium Blue 作为显色钙指示剂。其吸光度随钙结合而变化。 Calcium Blue 在中性pH范围内紧密结合钙，产生钙蓝色 - 钙复合物，在~650 nm处具有强烈的吸收。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法钙离子定量试剂盒。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收: | 600 or 650nm |
| 推荐孔板： | 透明底板 |
样品实验方案
简要概述
准备测试样品和钙标准溶液（50μL）
添加Calcium Blue 试剂（50μL）
在室温下孵育5-10分钟
监测600或650 nm处的吸光度强度
溶液配制
1.储备溶液配制
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
钙标准溶液（3 mM）：
将10μL标准钙（300mM）（组分C）加入到990μL稀释缓冲液（组分B）中以得到钙标准溶液（3mM）并充分混合。
2.钙标准溶液配制
操作步骤
表1.透明底96孔微孔板中钙标准品和测试样品的布局。
CS =钙标准（CS1-CS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| CS1 | CS1 | ... | ... |
| CS2 | CS2 | ... | ... |
| CS3 | CS3 | ||
| CS4 | CS4 | ||
| CS5 | CS5 | ||
| CS6 | CS6 | ||
| CS7 | CS7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 钙标准 | 空白对照 | 测试样本 |
| 连续稀释：50μL | 稀释缓冲液（化合物B）：50μL | 50 µL |
钙测定
将连续稀释的钙标准品从150μM加至2.34μM加入CS1至CS7的孔中，一式两份。
向钙标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLCaliumBlue （组分A），使总钙测定体积达到100μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。
在室温下孵育反应5至10分钟，避光。
用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。
血清或尿液样本的分析方案
表3.每个孔的试剂组成
| 钙标准 | 空白对照 | 血清或尿液 |
| 连续稀释液：10μL | 稀释缓冲液（化合物B）：10μL | 10 µL |
钙测定
1.将1.5μM至0μM的连续稀释的钙标准品一式两份加入CS1至CS7的孔中。
2.向钙标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入200μL钙蓝™（组分A），使总钙测定体积达到210μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。
3.在室温下孵育反应5至10分钟，避光。
4.用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。
数据分析
从空白标准孔获得的读数（吸光度）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算钙样品。
| 图1.使用Amplite 比色钙定量试剂盒在96孔黑色/透明底板上测量钙剂量响应。 在5分钟的孵育时间内检测到低至~2.5μM的Ca2+（n = 3） |
参考文献
High efficiency single-step biomaterial-based microparticle fabrication via template-directed supramolecular coordination chemistry
Authors: Kwok Kei Lai, Reinhard Renneberg, Wing Cheung Mak
Journal: Green Chemistry (2016): 1715--1723
Microcystin-LR causes sexual hormone disturbance in male rat by targeting gonadotropin-releasing hormone neurons
Authors: Xueting Wang, Jie Ding, Zou Xiang, Peipei Jiang, Jing Du, Xiaodong Han
Journal: Toxicon (2016): 45--55
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