Amplite 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒

Amplite 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于β-内酰胺酶活性检测的试剂盒，β-内酰胺酶是能够水解β-内酰胺的大家族酶。β-内酰胺环是所有β-内酰胺中的常见成分，包括青霉素衍生物，头孢菌素，单环内酰胺和碳青霉烯类。通过水解，β-内酰胺酶使β-内酰胺环打开，从而使分子的性能失活。临床和非临床环境中的通过合成β-内酰胺酶变得越来越对β-内酰胺产生抗性。为了克服这种抗性，β-内酰胺通常与β-内酰胺酶抑制剂如克拉维酸一起给予。因此，检测β-内酰胺酶活性对于评估β-内酰胺以及预防抗性至关重要。AAT Bioquest的比色β-内酰胺酶活性测定试剂盒提供灵敏的比色测定，用于测量生物样品中的β-内酰胺酶活性。使用Nitrocefin检测β-内酰胺酶活性，其在β-内酰胺酶水解后由黄色变为红色。可以使用吸光度酶标仪通过测量波长490nm至380nm的OD比来进行测定。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的β-内酰胺酶活性检测试剂盒。 

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收：	490/380 nm
推荐孔板:	透明底板

96孔板实验示例

概述

准备β-内酰胺酶测定混合物（50μL）

加入β-内酰胺酶标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30-60分钟

在OD比率为490 / 380nm时监测吸光度增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

 

操作方案

1.制备β-内酰胺酶标准储备液：

将100μLddH2O加入到β-内酰胺酶标准品（组分C）的小瓶中以制备50mU /mLβ-内酰胺酶标准储备溶液。

注意：未使用的β-内酰胺酶标准储备液应分成一次性等分试样并储存在-20oC。

 

2.准备β-内酰胺酶标准品的连续稀释液：

2.1将10μLβ-内酰胺酶标准储备液（50 mU / mL，步骤1）加入990 L 1×PBS缓冲液中，生成500μU/mLβ-内酰胺酶标准溶液。

注意：稀释的β-内酰胺酶标准溶液不稳定，应及时使用。

2.2取200μL500μU/mLβ-内酰胺酶标准溶液，在PBS中进行1：2连续稀释，得到约250,125,62.5,31.3,15.6,7.8和0μU/ mL系列稀释的β-内酰胺酶标准品。

2.3如说明书中的表1和2中所述，将含有β-内酰胺酶标准品和含β-内酰胺酶的测试样品的系列稀释液加入到96孔透明底部微量培养板中。

 

3.准备β-内酰胺酶测定混合物：

将50μL硝基呋喃储备溶液（组分A）加入5mL组分B中，充分混合，制成β-内酰胺酶测定混合物（组分A + B）。

注意：这种β-内酰胺酶测定混合物足以用于一个96孔板。 β-内酰胺酶测定混合物不稳定，每次使用都要新鲜。

 

4.运行β-内酰胺酶测定：

4.1将50μLβ-内酰胺酶测定混合物（来自步骤3）添加到β-内酰胺酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤2.3），使总体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLβ-内酰胺酶测定混合物。

4.2在室温下孵育反应30-60分钟，避光。

4.3使用吸光度读板仪检测OD比为490/380 nm时的吸光度增加。

 

参考文献

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