Cell Meter 抗氧化活性检测试剂盒

Cell Meter 抗氧化活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ROS的试剂盒，活性氧（ROS）在细胞信号传导和维持生理细胞代谢中是重要的。 过量的ROS损害细胞成分，这些成分与多种疾病相关，包括癌症，代谢紊乱，神经退行性疾病等。产生抗氧化剂，包括酶，大分子和小分子，以对抗ROS诱导的生物体内的损伤。 体液，组织和细胞中抗氧化活性的定量分析提供了重要的生物信息。 我们的Amplite™比色抗氧化检测试剂盒使用ABTS作为抗氧化活性的比色指示剂，基于观察到抗氧化剂能够阻止ABTS（2,2'-连氮基 - 双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）氧化的能力 ABTS +通过辣根过氧化物酶（HRP）和过氧化氢（H2O2）ABTS +，一种可溶性色原，可以在405nm处用分光光度法监测。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 抗氧化活性检测试剂盒。 

样品实验方案

简要概述

1.准备样品/ Trolox（10 µL）
2.添加HRP（20 µL）
3.添加ReadiUse ABTS底物溶液（150 µL）
4.在室温下孵育5分钟
5.监控405 nm处的吸光度

 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 辣根过氧化物酶（HRP）储备溶液（2000X）：
向辣根过氧化物酶（组分A）的小瓶中加入1 mL分析缓冲液（组分B）。

1.2 Trolox标准溶液（100毫米）：
将100 µL DMSO加到Trolox瓶中（组分D）。

 

2.标准溶液配制

Trolox标准
通过使用稀释因子= 2和高浓度= 1 mM在测定缓冲液（Componenet B）中稀释100 mM Trolox标准溶液来制备Trolox标准溶液。

 

3.工作溶液配制

将2.5 uL的2000X HRP储备溶液添加到5 mL的测定缓冲液（组分B）中，制成1X HRP工作溶液。

 

样品操作及实验分析

表1.在透明的96孔微孔板中的Trolox标准品和测试样品的布局。 SD = trolox标准品（SD1-SD7，0.0156至1 mM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	...	...
SD2	SD2	...	...
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释（0.0156至1 mM）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	样品

1.根据表1和表1中的布局，准备trolox标准品（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）（如有必要，在测定缓冲液中稀释样品，使抗氧化剂水平与Trolox处于同一范围内），表2。

2.在Trolox标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入20 µL HRP工作溶液，使总体积为30 µL /孔。

3.向每个孔中加入150 µL ReadiUse ABTS底物溶液（组分C），总体积为180 µL /孔。 注意：避免光照，并在聚丙烯容器中使用。

4.在室温下孵育5分钟。 注意：这5分钟的保温时间是一个指导原则。 可以改变孵育时间以获得更合适的吸光度。

5.使用酶标仪读取405 nm处的吸光度。

 

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44--48

Gene silencing of endothelial von Willebrand Factor attenuates angiotensin II-induced endothelin-1 expression in porcine aortic endothelial cells
Authors: Anar Dushpanova, Silvia Agostini, Enrica Ciofini, Manuela Cabiati, Valentina Casieri, Marco Matteucci, Silvia Del Ry, Aldo Clerico, Sergio Berti, Vincenzo Lionetti
Journal: Scientific Reports (2016)

 

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Cell Meter 比色法细胞毒性检测试剂盒	Cat#22780