细胞运动过程中的GSH与NAD+
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细胞运动是一个高度协同的复杂过程，在运动过程中，不仅需要肌动蛋白微丝/微管，还有多种细胞器、酶等共同调节。 谷胱甘肽( GSH )是由L -半胱氨酸、L -谷氨酸和甘氨酸三个氨基酸组成的三肽。它参与蛋白质二硫键的形成和维持、氨基酸跨细胞膜的运输，以及解毒。由于谷胱甘肽含有巯基，它是细胞内主要的内源性抗氧化剂，通过中和自由基和过氧化物等活性氧防止损伤。通过检测生物样品中还原型和氧化型谷胱甘肽可以客观的评估细胞、组织抗氧化能力以及解毒状态等。 我们研发了两种用于谷胱甘肽的检测试剂盒：1.Amplite 荧光法谷胱甘肽检测试剂盒；2.Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒。 1.GSH检测 Amplite 荧光法谷胱甘肽( Glutathione )检测试剂盒是一种灵敏的、一步法荧光检测试剂盒，在100 µL的检测体积内检测到至少1皮摩尔的GSH。该方法采用一种专有的非荧光和pH依赖的谷胱甘肽探针，该探针与巯基反应后具有强荧光。该检测可采用方便的96孔或384孔微孔板进行实验，无需分离步骤，易于自动化。在Ex / Em = 490 / 520 nm处，利用荧光酶标仪可以很容易地检测到荧光信号。
图1 . GSH剂量反应检测。用Amplite 荧光谷胱甘肽试剂盒( Cat # 10055 )在96孔黑色平板上进行检测。培养10分钟可检测到低至10nM ( 1pmol / well )的GSH。 2.GSH/GSSG比率检测 我们的Amplite 荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率检测试剂盒和 Amplite 快速荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率检测试剂盒，可在 100 µL 检测体积中定量低至 1 皮摩尔的 GSH。每个试剂盒都使用专有的非荧光探针，该探针在与 GSH 反应时会发出强荧光，并且可以使用荧光酶标仪在 Ex/Em = 490/520 nm 处检测其信号。检测可以在方便的 96 孔或 384 孔微孔板进行实验，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。这些试剂盒的不同之处在于探针的溶解度。 Amlite 荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率检测试剂盒使用的是可溶于 DMSO 的探针 Thiolite Green。 Amlite 快速荧光法谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率检测试剂盒使用水溶性探针 Thiolite Green 520WS。
图 2. GSH 和总 (GSH + GSSG) 剂量反应的检测是用 Amlite 荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率检测试剂盒进行检测的。蓝线：仅存在 GSH。红线：存在 1:1 GSH/GSSG。
表1：谷胱甘肽检测的相关产品
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸是丰富的可溶性辅助因子，在主要代谢途径中经历可逆氧化和还原。在细胞中，它们以未磷酸化（NAD 和 NADH）和磷酸化（NADP 和 NADPH）形式以氧化和还原状态存在。这些二核苷酸成对工作，每对都有不同的功能。它们已成为癌症研究的焦点，因为作为代谢物，它们可以将代谢途径与转录控制、表观遗传学和细胞信号传导联系起来，它也是研究细胞从正常代谢转变为癌细胞代谢的重要工具。 1.NAD/NADH NAD常与分解代谢途径(糖酵解和氧化磷酸化)相关，但其在细胞中的作用不仅仅涉及能量代谢。NAD是多种信号通路的重要底物，参与基因表达的表观遗传调控。它是ADP核糖基化的底物，在DNA修复、信号调节和信号传导中发挥重要作用。NAD / NADH的比值影响许多酶的活性，特别是糖酵解酶的活性。 2.NADP/NADPH NADP / NADPH是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中含量少的一对。NADPH与大分子的生物合成有关，为这些合成反应提供必要的还原力。生物合成增加的特点是迅速增殖的细胞，如癌细胞，因为NADPH被认为是癌症代谢产生的关键分子。它还对活性氧( Reactive oxygen species，ROS )的生成具有响应作用。
图 3. 使用Amlite 比色法 NAD/NADH 比率检测试剂盒（货号#15273）检测 96 孔白色透明底微孔板中的 NAD/NADH 比率。 表3：NAD/NADH相关产品
表4：NADP/NADPH相关产品
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