CCK-8 常见问题详解（精）

今天百萤生物为您介绍CCK-8在使用中常见的问题

1：CCK的保存和稳定性如何？

答：CCK稳定性高，避光条件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。经常使用建议4℃保存，避免反复冻融。CCK正常颜色为粉红色，若颜色发生明显偏差，质量可能有发生变化。

 

2：CCK的细胞毒性如何？

答：CCK毒性非常低，因此CCK检测完后相同的细胞还能用于其它细胞增殖检测如结晶紫染色法，中性红染色法或DNA荧光染色法。

 

3：CCK会对活细胞进行染色吗？

答：不会，首先WST-8不会进入细胞染色，整个显色反应都是在培养体系中进行的。另外WST和WST-8甲臜都属于高度水溶性组分，反应结束更换新的培养液，即可外源组分。

 

4：做细胞活性检测时，每孔应该接种多少个细胞？

答：当使用标准96孔板时，贴壁细胞的小接种量至少为1,000个/孔(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100 μL培养基)。

 

5：若是使用6孔或者24孔板进行试验，CCK试剂使用量怎么样呢？

答：如果要使用6孔板或24孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。

 

6：能否用384孔板进行细胞增殖与活性检测的实验呢？

答：可以，CCK-8产品的使用量为每孔培养基总体积的10%。建议先将CCK-8产品稀释一倍，然后加入培养基总体积的20%即可，这样可减少误差。

 

7：培养基的本底颜色如酚红会不会影响细胞活性的检测呢？

答：不会的，培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光值而消去，因此不会对检测造成影响。

 

8：在加入CCK-8时可否不更换培养基？

答：一般情况下可以不更换培养基。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话，有可能会产生误差，必须更换其它培养基。

 

9：只可以在450 nm波长处测OD值吗？

答：可以在450 nm波长处测OD值，但是若无此波长的滤光片，可选择吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度高。

 

10：若是暂不检测OD值，该如何处理？

答：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化

 

11：在实验中OD值太高，怎么解决？

答：可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如：可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。此外，可适当减少细胞的数量。

 

12：如果OD值太低，怎么解决？

答：可以采取2个办法：1、适当增加细胞数量  2、延长加入CCK-8试剂后的反应时间。

 

13：应该每次做标准曲线吗？

答：建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。

 

14：在cck-8显色过程中，如何终止反应

答:有以下几种方法（96孔板）：1.在显色反应后，将培养板放置4°冰箱内；2.每孔加入10ul 0.1M HCL溶液。 3.每孔加入10ul 1%（w/v）的SDS溶液。注：反应停止后，应在24h内测定

 

15:如何减少由于CCK-8试剂在孔壁上的残留所带来的误差

答：可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样

 

16.好用的 CCK-8 试剂盒推荐？

答：百萤生物生产的 Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞活力检测试剂盒已广泛用于生物活性因子的活性检测，抗肿瘤药物的筛选，细胞增殖的测定，细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验

 

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