钙指示剂

English title: Calcium Indicators

Published on 2021-09-16

细胞中的钙流检测广泛应用于高通量筛选（HTS），通过G蛋白偶联受体（GPCR）确定激动剂刺激和拮抗剂抑制的信号传导，G蛋白偶联受体是一个大家族的整合膜蛋白，也是药物发现中的一个重要靶类。对细胞内钙浓度和动员的测量有助于更地了解钙调节的信号通路、细胞功能和病理过程。

百萤生物的钙指示剂集合，包括Fluo-8®、Cal-520®和Calbryte 钙指示剂，以及钙通量分析，用强烈的荧光信号和从紫外线到红外的各种波长选项跟踪钙动员。

定量胞浆钙

钙是一种普遍存在的信使，影响许多信号转导途径，包括钙诱导的蛋白质确认变化、胞浆和细胞器钙水平的调节、钙介导的信号转导的高度局部化性质及其在兴奋性、胞吐、运动性和凋亡中的特殊作用，和转录。这些途径调节许多关键的细胞过程，包括神经传递、细胞增殖和肌肉收缩。在细胞外液的正常条件下，静止的细胞质钙浓度相对较低，在100nm或以下。钙信号通过细胞内钙离子释放或细胞外钙离子通过质膜离子通道流入。受刺激的细胞可以增加细胞质钙浓度达500至1000nM。

用于活细胞钙成像的荧光AM酯衍生物

荧光钙指示剂使研究人员能够利用荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱学和荧光酶标仪研究细胞内游离钙浓度的变化。为了便于检测细胞内钙动员和促进被动扩散，乙酰氧基甲酯（AM酯）官能团附着在钙指示剂的核心结构上。这增加了指示剂的疏水性，使其能够轻松穿透完整的质膜，并通过小化非特异性背景荧光来提高指示剂的灵敏度，因为AM酯共轭指示剂本质上是非荧光和非活性的。

一旦探针进入活细胞并且只有在细胞内酯酶去除AM酯官能团后，活性才开始。一旦，探针通过螯合作用检测钙，并通过产生与钙浓度相关的荧光信号进行响应。Fluo-8®、AM（货号21080）、Cal-520®、AM（货号21131）和Calbryte 520，AM（货号20653）等指示剂已广泛用于钙成像、钙通量分析和基于细胞的高通量筛选（HTS）分析，用于药物发现。钙指示剂可用于流式细胞仪、荧光显微镜和荧光酶标仪。除了提供荧光和发光钙指示剂外，我们还提供几种非荧光钙信号分子和螯合剂，用于检测和监控细胞内外的钙离子。

单波长钙指示剂

单波长钙指示剂广泛用于检测钙动员、钙信号的空间动力学图像，以及通过GPCR在HTS细胞中筛选激动剂刺激和拮抗剂抑制的信号。这些指示剂在饱和钙水平下表现出很明显的钙依赖性荧光强度变化，而不会改变其吸光度或发射波长。我们开发了多种新型钙指示剂，包括Fluo-8®系列、Cal-520®系列和Calbryte 系列，用于通过亮的荧光信号和一系列波长和亲和力选项追踪钙动员，以满足许多应用。

单波长钙指示剂的主要特点

静息钙水平下的小背景荧光
改进的信号背景比
大大提高了细胞保留率
用于活细胞钙分析的细胞渗透（与成像、流式细胞术和微孔板分析兼容，如HTS）
通过微量注射、贴片移液管等方式进行染色的试剂格式
紫外线（UV）、紫外光和可见光可激发格式
低、中、高亲和力格式提供了一个灵敏度范围，可满足许多应用

图1 在CHO-K1细胞中检测ATP反应

表1 用于细胞内钙检测的绿色荧光钙指示剂

染料	Ex/Em (nm)	滤波片	Kd	Φ	FCa/FFree	相对亮度	信号/噪声	规格	货号
Calbryte 520, AM	492/514	FITC	1.2 µM	0.75	∼300 fold	*****	*****	10 x 50 µg	20651
Cal-520^®, AM	492/514	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	***	***	10 x 50 µg	21130
Fluo-8^®, AM	494/515	FITC	389 nM	0.16	∼200 fold	***	***	10 x 50 µg	21082
Fluo-4, AM	492/527	FITC	345 nM	0.16	∼100 fold	**	**	10 x 50 µg	20551
Fluo-3, AM	506/515	FITC	390 nM	0.15	∼100 fold	*	*	20 x 50 µg	21013

表2 用于细胞内钙检测的长波长Rhod钙指示剂

染料	Ex/Em (nm)	滤波片	Kd	规格	货号
Rhod-2, AM	552/576	TRITC	570 nM	20 x 50 µg	21064
Rhod-4, AM	521/549	TRITC	451 nM	10 x 50 µg	21122
Rhod-5N, AM	557/579	TRITC	300 µM	1 mg	21070
Rhod-FF, AM	552/576	TRITC	19 µM	10 x 50 µg	21078

比率钙指示剂

与单波长指示剂相比，比率指示剂（或双波长指示剂）具有独特的光谱特性，可响应结合钙而触发。当与钙结合时，比率指示剂的佳吸光度或发射波长强度发生变化。例如，双激发钙指示剂Fura-2、AM和Fura-8、AM，当结合或游离钙时，表现出双峰激发波长。当分别在钙结合和无钙峰值激发波长下激发时，钙浓度的增加引起双激发指示剂荧光发射强度的增加和减少。

比率钙指示剂的主要特征

比率测定法可测量细胞内钙浓度
大限度地减少染料负载不均、染料泄漏、光漂白和细胞厚度变化（混合群体中常见）的影响
提供更可靠和可重复的结果
双激励、双发射或双激励和双发射格式的指示剂
膜渗透AM酯格式（与成像、流式细胞术和微孔板分析兼容，如HTS）
紫外线（UV）、紫外光和可见光可激发格式
可作为膜不渗透盐衍生物，通过微量注射、贴片移液管

图2 用Fura-2 AM（货号21023）和Fura-8 AM测量CHO-K1细胞中ATP的剂量反应（货号21056）。

表3 双波长比率钙指示剂选择指南

	Fura-2,AM	Fura-FF,AM	Fura-8 ,AM	Fura-8FF,AM	Fura Red,AM	Indo-1,AM	Cal Red R525/650,AM
荧光产生原理	与钙结合后比例激发波长发生变化					与钙结合后比例发射波长发生变化
荧光变化原理	激发波长变化					发射波长变化
Ex / Em（nm）（不结合钙时）	340/510	340/510	354/524	354/524	435/650	355/475	490/660
Ex / Em（nm）（结合大量钙时）	380/510	380/510	415/524	415/524	471/650	355/400	490/525
ķ _d	145 nM	5.5 µM	260 nM	6 µM	400 nM	230 nM	330 nM
形式	AM酯	AM酯	AM酯	AM酯	AM酯	AM酯	AM酯
渗透性	细胞可渗透
细胞加载	通过细胞培养基加载到活细胞中
规格	20x50 µg	10x50 µg	1 mg	10x50 µg	1 mg	20x50 µg	10x50 µg
货号	21023	21027	21055	20620	21046	21036	20591

表4 比率钙指示剂产品

货号＃	产品名称	Ex（nm）	Em(nm)	规格
20588	Cal Red R525 / 650钾盐	492	650	5x50 ug
20590	Cal Red R525 / 650 AM	492	650	1mg
20591	Cal Red R525 / 650 AM	492	650	10x50 ug
20620	Fura-8FF ，AM	354	525	10x50 ug
20621	Fura-8FF ，五钾盐	354	415	10x50 ug
21020	Fura-2，AM * CAS 108964-32-5 *	363	512	1mg
21021	Fura-2，AM 超纯级 * CAS 108964-32-5 *	363	512	1mg
21022	Fura-2，AM * CAS 108964-32-5 *	363	512	50mg
21023	Fura-2，AM 超纯级 * CAS 108964-32-5 *	363	512	20x50 ug
21025	Fura-2，五钾盐* CAS 113694-64-7 *	363	512	1mg
21026	Fura-2，五钠盐	363	512	1mg
21027	Fura-FF，AM* CAS 348079-12-9 *	363	512	10x50 ug
21028	Fura-FF，五钾盐* CAS 192140-58-2 *	363	512	10x50 ug
21029	Fura-FF，五钾盐* CAS 192140-58-2 *	363	512	1mg
21030	Indo-1, AM* CAS 112926-02-0 *	346	475	1mg
21032	Indo-1, AM超纯级 * CAS 112926-02-0 *	346	475	1mg
21033	Indo-1, AM* CAS 112926-02-0 *	346	475	50mg
21036	Indo-1, AM超纯级 * CAS 112926-02-0 *	346	475	20x50 ug
21040	Indo-1,五钾盐* CAS 132319-21-9 *	346	475	1mg
21044	Indo-1，五钠盐	346	475	1mg
21045	Fura Red,钾盐	458	597	1mg
21046	Fura Red，AM * CAS 149732-62-7 *	458	597	1mg
21047	Fura Red, 钾盐	458	597	10x50 ug
21048	Fura Red, AM CAS 149732-62-7	458	597	10x50 ug
21050	Quin-2，AM * CAS 83104-85-2 *	353	495	1mg
21052	Quin-2四钾盐* CAS 149022-19-5 *	353	495	5mg
21055	Fura-8 ，AM	354	525	1mg
21056	Fura-8 ，AM	354	525	10x50 ug
21057	Fura-8 ，五钾盐	354	525	1mg
21058	Fura-8 ，五钠盐	354	525	1mg
36320	Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒	370	476	10Plates
36321	Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒	370	476	100Plates

Calbryte 钙指示剂

Calbryte系列染料是一系列明亮、可靠的钙指示剂，用于监测细胞内钙的动员。它包括三种新的钙指示剂，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630，它们的主要区别在于吸收率和发射波长。Calbryte 探针以显著更高的信号-背景特征发射荧光信号，并大大增强了细胞保留。Calbryte系列产品已优化用于荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪。它们也可用于高通量筛选应用。

Calbryte的主要特征：

Calbryte在相同条件下，探针的亮度明显高于任何其他钙指示剂
大大提高了信号背景比
增强细胞内保留，丙磺舒的使用
在45到60分钟内快速方便地进入细胞
均质胞浆定位
Calbryte 590和Calbryte 630可与GFP或其他绿色荧光染料一起用于多路复用
膜渗透AM酯形式（与成像、流式细胞术和微孔板分析兼容，如HTS）
可作为膜不渗透盐衍生物，通过微量注射、贴片移液管等进入细胞
可作为活性染料与载体结合

的信噪比和细胞内保留特性

图3 在CHO-K1细胞中测定丙磺舒游离ATP诱导的钙反应

表5 Calbryte用于活细胞钙成像的钙指示剂

染料	Ex (nm)	Em (nm)	滤波片	Kd	FCa/FFree	规格	货号
Calbryte 520, AM	493	515	FITC	1.2 µM	∼300 fold	2x50 µg	20650
Calbryte 520, AM	493	515	FITC	1.2 µM	∼300 fold	10x50 µg	20651
Calbryte 520, AM	493	515	FITC	1.2 µM	∼300 fold	1 mg	20653
Calbryte 520, 钾盐	493	515	FITC	1.2 µM	∼300 fold	2x50 µg	20656
Calbryte 520, 钾盐	493	515	FITC	1.2 µM	∼300 fold	10x50 µg	20658
Calbryte 520L, AM	493	515	FITC	100 µM	∼300 fold	10x50 µg	20640
Calbryte 520L, 钾盐	493	515	FITC	100 µM	∼300 fold	10x50 µg	20642
Calbryte -520XL 叠氮化物	493	515	FITC	300 µM	∼300 fold	1 mg	20643
Calbryte -520XL azide	493	515	FITC	300 µM	∼300 fold	10x50 µg	20645
Calbryte 590, AM	581	593	Cy3/TRITC	1.4 µM	∼300 fold	2x50 µg	20700
Calbryte 590, AM	581	593	Cy3/TRITC	1.4 µM	∼300 fold	10x50 µg	20701
Calbryte 590, AM	581	593	Cy3/TRITC	1.4 µM	∼300 fold	1 mg	20702
Calbryte 590, 钾盐	581	593	Cy3/TRITC	1.4 µM	∼300 fold	5x50 µg	20706
Calbryte 590, 钾盐	581	593	Cy3/TRITC	1.4 µM	∼300 fold	1 mg	20707
Calbryte 630, AM	607	624	Texas Red	1.2 µM	∼300 fold	2x50 µg	20720
Calbryte 630, AM	607	624	Texas Red	1.2 µM	∼300 fold	10x50 µg	20721
Calbryte 630, AM	607	624	Texas Red	1.2 µM	∼300 fold	1 mg	20722
Calbryte 630, 钾盐	607	624	Texas Red	1.2 µM	∼300 fold	5x50 µg	20727

Cal-520®钙指示剂

Cal-520®钙指示剂系列是的荧光钙敏感染料组合。它包括六个独特的指示剂，即Cal-500 , Cal-520®，Cal-590 , Cal-630 , Cal-670 和Cal-770 , 它们不同之处主要在于吸收和发射。在钙的静止水平下，每种指示剂都会发出小的荧光，在钙的饱和浓度下，荧光强度会增加100倍以上。Cal-520 系列指示剂有膜渗透性AM酯、膜不渗透性盐衍生物和葡聚糖共轭物形式三种。

Cal-520®钙指示剂的主要特点

信号背景比高于Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2和Rhod-5
增强细胞内保留
方便的细胞加载
均质胞浆定位
Cal-590 , Cal-630 , Cal-670 和Cal-770 可与GFP或其他绿色荧光染料一起用于多路复用
Cal-770 可用于体内研究
膜渗透AM酯形式（与成像、流式细胞术和微孔板分析兼容，如HTS）
可作为膜不渗透盐衍生物，通过微量注射、贴片移液管等方式进入细胞
可作为活性染料用于与载体结合

图4 ATP刺激Cal-520 AM孵育的CHO-K1细胞内源性P2Y受体的钙反应（红色曲线）或FLOO-4 AM（蓝色曲线），不含丙磺舒。

表6 用于活细胞钙成像和多色钙通量分析的Cal-520®钙指示剂

染料	Ex (nm)	Em (nm)	滤波片	Kd	Φ	FCa/FFree	规格	货号
Cal-500 , AM	388	482	DAPI	303 nM	0.48	∼100 fold	10x50 µg	20412
Cal-500 , 钾盐	388	482	DAPI	303 nM	0.48	∼100 fold	10x50 µg	20410
Cal-520®, AM	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	10x50 µg	21130
Cal-520®, 钾盐	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	10x50 µg	21140
Cal-590 AM	574	588	Cy3/TRITC	561 nM	0.62	∼100 fold	5x50 µg	20510
Cal-590 钾盐	574	588	Cy3/TRITC	561 nM	0.62	∼100 fold	5x50 µg	20518
Cal-630 AM	609	626	Texas Red	792 nM	0.37	∼100 fold	5x50 µg	20530
Cal-630 , 钾盐	609	626	Texas Red	792 nM	0.37	∼100 fold	5x50 µg	20538
Cal-670 , 钾盐	667	680	Cy5	853 nM	N/D	∼100 fold	10x50 µg	20455
Cal-770 , 钾盐	758	783	Cy7	850 nM	N/D	∼100 fold	10x50 µg	20460
Cal-520®, AM	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	1 mg	21131
Cal-520FF™, AM	493	515	FITC	9.8 µM	0.75	∼100 fold	10x50 µg	21143
Cal-520FF™, AM	493	515	FITC	9.8 µM	0.75	∼100 fold	1 mg	21142
Cal-520N™, AM	493	515	FITC	90 µM	0.75	∼100 fold	10x50 µg	21146
Cal-520®, potassium salt	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	1 mg	21141
Cal-520®, sodium salt	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	10x50 µg	21135
Cal-520®, sodium salt	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	1 mg	21136
Cal-520FF™, potassium salt	493	515	FITC	9.8 µM	0.75	∼100 fold	10x50 µg	21144
Cal-520N™, potassium salt	493	515	FITC	90 µM	0.75	∼100 fold	10x50 µg	21147
Cal-520®-Dextran Conjugate MW 3,000	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	1 mg	20600
Cal-520®-Dextran Conjugate MW 10,000	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	5 mg	20601
Cal-520L®-Dextran Conjugate MW 10,000	493	515	FITC		0.75	∼100 fold	1 mg	20602
Cal-520®-Biotin Conjugate	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	5x50 µg	20605
Cal-520®-Biocytin Conjugate	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	5x50 µg	20606
Cal-520® NHS Ester	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	100 µg	20609
Cal-520® maleimide	493	515	FITC	320 nM	0.75	∼100 fold	100 µg	20610
Cal-590™ AM	574	588	Cy3/TRITC	561 nM	0.62	∼100 fold	10x50 µg	20511
Cal-590™ AM	574	588	Cy3/TRITC	561 nM	0.62	∼100 fold	1 mg	20512
Cal-590™ potassium salt	574	588	Cy3/TRITC	561 nM	0.62	∼100 fold	1 mg	20519
Cal-590™ sodium salt	574	588	Cy3/TRITC	561 nM	0.62	∼100 fold	5x50 µg	20515
Cal-590™-Dextran Conjugate MW 3,000	574	588	Cy3/TRITC	561 nM	0.62	∼100 fold	1 mg	20508
Cal-590™-Dextran Conjugate MW 10,000	574	588	Cy3/TRITC	561 nM	0.62	∼100 fold	1 mg	20509
Cal-630™ AM	609	626	Texas Red	792 nM	0.37	∼100 fold	10x50 µg	20531
Cal-630™ AM	609	626	Texas Red	792 nM	0.37	∼100 fold	1 mg	20532
Cal-630™, sodium salt	609	626	Texas Red	792 nM	0.37	∼100 fold	5x50 µg	20535
Cal-630™-Dextran Conjugate MW 10,000	609	626	Texas Red	792 nM	0.37	∼100 fold	1 mg	20546
Cal-670™-Dextran Conjugate MW 3,000	667	680	Cy5	853 nM	N/D	∼100 fold	1 mg	20456
Cal-670™-Dextran Conjugate MW 10,000	667	680	Cy5	853 nM	N/D	∼100 fold	1 mg	20457
Cal-770™-Dextran Conjugate MW 3,000	758	783	Cy7	853 nM	N/D	∼100 fold	1 mg	20461
Cal-770™-Dextran Conjugate MW 10,000	758	783	Cy7	853 nM	N/D	∼100 fold	1 mg	20462

Fluo 8®钙指示剂

Fluo-8® AM 解决了Fluo染料常见的主要限制之一，即细胞加载所需的苛刻条件。传统的荧光染料，例如 Fluo-2 AM（货号 20495）、Fluo-3 AM（货号 21013 和 Fluo-4 AM（货号 20550））需要在 37°C 下与细胞一起孵育在读取读数前多需要一个小时。还需要用户花时间加热和冷却细胞培养物。此外，它还引入了孵化温度作为可能的混杂变量。Fluo-8® AM 通过提供可在室温下加载到细胞中的钙指示剂解决了所有这些问题。Fluo-8® AM 与其他基于荧光的染料相比对温度的依赖性更小，允许在更广泛的实验条件下获得更一致的结果。此外，Fluo-8® AM 的孵育时间仅为 20 分钟,Fluo-8® AM 的光谱特性与Fluo-4一致，（即 Ex/Em = 494/517nm）。

Fluo 8®钙指示剂的主要特点

更快的细胞加载：Fluo 8®可以在室温下轻松加载到细胞中。Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37°C的加载温度
更亮的荧光：Fluo 8®比Fluo-4 AM亮2倍，比Fluo-3 AM亮4倍
方便：Fluo 8®的光谱与Fluo-4和Fluo-3的光谱相同

图5 在HEK-293细胞中检测卡巴胆碱剂量反应

表7 用于活细胞钙成像的Fluo-8®绿色荧光钙指示剂

指示剂	Ex (nm)	Em (nm)	滤波片	Kd	Φ	FCa/FFree	规格	货号
Fluo-8®, AM	495	516	FITC	389 nM	0.16	∼200 fold	1 mg	21080
Fluo-8®, AM	495	516	FITC	389 nM	0.16	∼200 fold	10x50 µg	21082
Fluo-8®, AM	495	516	FITC	389 nM	0.16	∼200 fold	20x50 µg	21083
Fluo-8®, AM	495	516	FITC	389 nM	0.16	∼200 fold	5x50 µg	21081
Fluo-8H , AM	495	516	FITC	232 nM	0.16	∼200 fold	10x50 µg	21091
Fluo-8H , AM	495	516	FITC	232 nM	0.16	∼200 fold	1 mg	21090
Fluo-8L , AM	495	516	FITC	1.9 µM	0.16	∼200 fold	1 mg	21096
Fluo-8L , AM	495	516	FITC	1.9 µM	0.16	∼200 fold	10x50 µg	21097
Fluo-8FF , AM	495	516	FITC	10 µM	0.16	∼200 fold	10x50 µg	21104
Fluo-8FF , AM	495	516	FITC	10 µM	0.16	∼200 fold	1 mg	21105
Fluo-8®, potassium salt	495	516	FITC	389 nM	0.16	∼200 fold	1 mg	21087
Fluo-8®, potassium salt	495	516	FITC	389 nM	0.16	∼200 fold	10x50 µg	21089
Fluo-8®, sodium salt	495	516	FITC	389 nM	0.16	∼200 fold	1 mg	21086
Fluo-8®, sodium salt	495	516	FITC	389 nM	0.16	∼200 fold	10x50 µg	21088
Fluo-8H™, sodium salt	495	516	FITC	232 nM	0.16	∼200 fold	10x50 µg	21095
Fluo-8L™, sodium salt	495	516	FITC	1.9 µM	0.16	∼200 fold	10x50 µg	21098
Fluo-8L™, sodium salt	495	516	FITC	1.9 µM	0.16	∼200 fold	1 mg	21099

Fluo-3和Fluo-4指示剂

Fluo-3 是一种钙指示剂，于 1989 年推出，用于流式细胞术和共聚焦激光扫描显微镜。 Fluo-3 是一种类似荧光素的化合物，在没有游离 Ca2+ 的情况下实际上是无荧光的。然而，与钙结合后，Fluo-3 在 525 nm 处的发射强度急剧增加。作为指标，Fluo-3 在细胞信号通路、肌细胞和神经递质的研究中至关重要。

Fluo-4 建立在 Fluo-3 的核心结构之上，但对其进行了修改以增强荧光信号强度。化学结构的改变导致 Fluo-4 的激发大值发生蓝移，从 506nm（Fluo-3）到 494nm。实际上，这个 12 nm 的偏移使 Fluo-4 的激发大值更接近标准氩激光器的波长（即 488nm）。这导致更好的激发，因此荧光信号明显更亮并且对钙浓度的变化更敏感。

Fluo 3, AM

Fluo 4, AM

Fluo 8, AM

表8 用于活细胞钙成像的Fluo-3、Fluo-4和Fluo-5绿色荧光钙指示剂

指示剂	Ex (nm)	Em (nm)	滤波片	Kd	Φ	FCa/FFree	规格	货号
Fluo-3, AM 超级纯	507	516	FITC	390 nM	0.15	∼100 fold	1 mg	21011
Fluo-3, AM	507	516	FITC	390 nM	0.15	∼100 fold	50 mg	21012
Fluo-3, AM	507	516	FITC	390 nM	0.15	∼100 fold	1 mg	21010
Fluo-3, AM	507	516	FITC	390 nM	0.15	∼100 fold	1 mg	21013
Fluo-3, 五钾盐	507	516	FITC	390 nM	0.15	∼100 fold	1 mg	21017
Fluo-3, 五铵盐	507	516	FITC	390 nM	0.15	∼100 fold	1 mg	21018
Fluo-3, 五钠盐	507	516	FITC	390 nM	0.15	∼100 fold	1 mg	21016
Fluo-3FF, 五钾盐	507	516	FITC	100 µM	0.15	∼100 fold	1 mg	21019
Fluo-5F, AM	494	516	FITC	2.3 µM	0.16	∼100 fold	10x50 µg	20560
Fluo-5N, AM	494	516	FITC	90 µM	0.16	∼100 fold	10x50 µg	20566
Fluo-5F, pentapotassium salt	494	516	FITC	2.3 µM	0.16	∼100 fold	500 µg	20562
Fluo-5N, pentapotassium salt	494	516	FITC	90 µM	0.16	∼100 fold	500 µg	20567
Fluo-4 AM Ultrapure Grade CAS 273221-67-3	495	528	FITC	345 nM	0.16	∼100 fold	1 mg	20550
Fluo-4 AM Ultrapure Grade CAS 273221-67-3	495	528	FITC	345 nM	0.16	∼100 fold	10x50 µg	20551
Fluo-4 AM Ultrapure Grade CAS 273221-67-3	495	528	FITC	345 nM	0.16	∼100 fold	5x50 µg	20552
Fluo-4, Pentapotassium Salt	495	528	FITC	345 nM	0.16	∼100 fold	1 mg	20555
Fluo-4, Pentapotassium Salt	495	528	FITC	345 nM	0.16	∼100 fold	1 mg	20556

用于筛选 GPCR 和钙通道靶标的钙检测

Screen Quest 钙流分析是基于细胞的高通量筛选 (HTS) 的方法，可通过 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 确定激动剂刺激和拮抗剂抑制的信号传导。迄今为止，市场上大约三分之一的药物是针对 GPCR。 Screen Quest 钙检测提供方便的免洗涤、均质荧光检测，用于检测GPCR 和钙通道，并检测广泛生物靶标的细胞内钙动员。该测定可以在方便的 96 孔或 384 孔微孔板中进行，并且可以很容易地适应自动化。 Screen Quest 钙检测试剂盒针对以下仪器进行了优化和验证：FDSS®、FLIPR®、ViewLux™、NOVOStar、ArrayScan™、FlexStation® 和 IN Cell Analyzer。

Screen Quest 钙检测的主要特点

经验证适用于各种酶标仪的优化方案
出色的信号强度（高 S/B 比）和孔间均匀性
用于检测具有挑战性的细胞系和受体的大检测窗口
用于 1536 孔板的高性能钙通量测定

图 7. 使用 Screen Quest Calbryte 520 钙检测试剂盒、FLIPR® 钙 4 检测（Molecular Devices）和 Fluo-4 Direct™ 钙检测（分子探针®）。 CHO-K1 细胞以 50,000 个细胞/100 µL/孔的浓度接种在 96 孔黑壁/透明底部肋板中过夜。分别用所有三种测定法测量钙通量响应。通过 FlexStation 3 添加 ATP（50 µL/孔）以达到终指示浓度。

表9. Screen Quest钙检测试剂盒用于筛选 GPCR 和钙通道靶标

钙检测试剂盒	Ex (nm)	Em (nm)	Cutoff (nm)	规格	货号
Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒	490	525	515	10 plates	36325
Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒	490	525	515	100 plates	36326
Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒	490	525	510	1 plates	36314
Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒	490	525	510	10 plates	36315
Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒	490	525	510	100 plates	36316
Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒	490	525	510	100 plates	36316
Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒适合于难检测细胞系	490	525	510	1 plates	36307
Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒适合于难检测细胞系	490	525	510	10 plates	36308
Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒适合于难检测细胞系	490	525	510	100 plates	36309
Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒	490	525	515	1 plates	36317
Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	490	525	515	10 plates	36318
Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	490	525	515	100 plates	36319
Screen Quest™ Fura-2 No Wash Calcium Assay Kit	340, 380	510	470	10 plates	36320
Screen Quest™ Fura-2 No Wash Calcium Assay Kit	340, 380	510	470	100 plates	36321
Screen Quest™ Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit	540	590	570	1 plates	36333
Screen Quest™ Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit	540	590	570	10 plates	36334
Screen Quest™ Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit	540	590	570	100 plates	36335
Screen Quest™ Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit Medium Removal	540	590	570	1 plates	36330
Screen Quest™ Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit Medium Removal	540	590	570	10 plates	36331
Screen Quest™ Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit Medium Removal	540	590	570	100 plates	36332
Screen Quest™ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	540	590	570	1 plates	36200
Screen Quest™ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	540	590	570	10 plates	36201
Screen Quest™ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	540	590	570	100 plates	36202

用于药物发现和高通量筛选的GPCR细胞系

Screen Quest 细胞系是一系列细胞，已成功用于药物发现和筛选环境，用于研究通常不通过细胞内钙偶联的 G 蛋白偶联受体 (GPCR)。它已与 FLIPR、FDSS 系统与许多受体的非 Gq 偶联成员（如趋化因子、血清素、谷氨酸、多巴胺、阿片类药物、加压素和 α- 和 β- 肾上腺素能受体家族）一起有效地使用。超过 60% 的已知 GPCR 信号通过 Gq 以外的途径传递，导致细胞内钙增加，并且随着基因组学揭示更多 G 蛋白偶联受体靶标，这一趋势继续增加。 Screen Quest 细胞系用于研究通常不通过细胞内钙偶联的 GPCR。

Screen Quest 细胞系基于一系列 G 蛋白嵌合体，包括混杂的 G 蛋白 Gα16。嵌合体由 Gq 蛋白复合物的 α 亚基组成，其 5 个羧基末端氨基酸已被其他 G 蛋白之一（Gαs、Gαi、Gαo 或 Gαz）的氨基酸取代。这些氨基酸负责将受体与其 G 蛋白偶联。这些嵌合体与通常通过 cAMP 途径起作用的特定非 Gq 偶联受体的共表达可能导致受体刺激后产生细胞内钙信号。

表10 用于药物发现和高通量筛选分析的稳定GPCR细胞系

产品名称	规格	货号
Screen Quest Amylin 3受体表达细胞株	Each	38000
Screen Quest 大麻素受体表达细胞株	Each	38001
Screen Quest 细胞趋化因子（c-c）受体2B表达细胞株	Each	38002
Screen Quest 细胞趋化因子（c-x-c motif）受体4表达细胞株	Each	38003
Screen Quest CHO-Ga16嵌合体细胞系	Each	38105
Screen Quest CHO-Gqi嵌合体细胞系	Each	38101
Screen Quest CHO-Gqo嵌合体细胞系	Each	38102
Screen Quest CHO-Gqs嵌合体细胞系	Each	38104
Screen Quest CHO-Gqz嵌合体细胞系	Each	38103
Screen Quest 多巴胺受体1表达细胞株	Each	38004
Screen Quest™ HEK-CNGC-Glucagon-like Receptor 1 (GLP1R) Cells	Each	38005
Screen Quest™ Human Nociceptin Receptor Ga16 coupled CHO Cells (NOP-Ga16)	Each	38100
Screen Quest™ Live Cell cAMP Assay Service Pack	Each	36382
Screen Quest™ HEK-CNGC-Opiate Receptor-like 1 (ORL1) Cells	Each	38006

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