小萤问号：细胞活性检测（全）

        从接触细胞，接触显微镜开始，我们的第一节必修课便是，如何知道自己研究的细胞是否还活着，就像垃圾分类一样，活细胞和死细胞的检测是不一样的，今天小萤就给大家科普一下如何检测自己研究的细胞还活着，它们活的好吗？

 

实验室细胞活性检测的常用方法（包括活性检测和增殖检测）：

 

化学发光法细胞活性检测

荧光染料细胞活性检测

细胞代谢检测

细胞计数检测（台盼蓝）

DNA合成增殖

 

接下来小萤将详细给大家介绍常用的细胞活性检测方法。

 

化学发光法细胞活性检测

        腺苷三磷酸（ATP adenosine triphosphate）是由腺嘌呤、核糖和3个磷酸基团连接而成，水解时释放出能量较多，是生物体内直接的能量来源。ATP发光法，是通过检测细胞内ATP含量来分析细胞活性及增殖的。

        常见的ATP发光法是利用外源萤火虫荧光素/荧光素酶与细胞内的ATP发生氧化反应而产生光子，通过监测光度来检测ATP含量，从而分析细胞活性与增殖。

原理图：

优点：灵敏、快速、便捷、稳定，同时可以把ATP数量化，用荧光强度（RLU）把光定量。

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荧光染料细胞活性检测

        在所有现有的荧光染料中，荧光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物（如CFSE）是非荧光分子，其扩散到细胞中并被细胞内非特异性酯酶水解以产生荧光。荧光产物仅在具有完整细胞膜和活性酯酶活性的细胞中产生和积累,荧光产物会跟随细胞分裂，被平均分配到子细胞中。进一步可用流式细胞仪分析细胞分裂增殖的情况。

优点：活体标记、简单、稳定、荧光时间长

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细胞代谢检测

        CCK-8检测是一种基于 SST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测。其主要成分为水溶性四唑盐 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，SST-8 是一种类似于 MTT 的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜。SST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

优点：

1.CCK-8法产生的甲臜是水溶性的，不仅省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差。.MTT实验生成的甲臜不是水溶性的，需要使用 DMSO 等有机溶剂溶解。

2.线性范围更宽，灵敏度更高。

3.对细胞性，可以多次测定，选取佳测定时间。

4.所用试剂在培养基中比 MTT 更加稳定，实验结果重复性好。

5.MTT 具有毒性，同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解，会对操作人员身体造成危害。

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细胞计数检测

        台盼蓝染料是一种重要的染色剂，可以将死组织或死细胞染成蓝色而具有完整细胞膜的活细胞或组织却不着色。 由于细胞在通过膜的化合物中具有很高的选择性，因此在活细胞中，台盼蓝不被吸收; 然而，它可以穿过死细胞中的膜。 因此，死细胞在显微镜下显示为独特的蓝色。 

优点：用于辨别区分死细胞和活细胞，以及检测细胞膜的完整性。

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DNA合成增殖

        BrdU是胸腺嘧啶的衍生物，常用于标记活细胞中新合成的DNA,可代替胸腺嘧啶选择性整合到复制细胞中新合成的DNA中（细胞周期S期）这种掺入可以稳定存在，随着DNA复制进入子细胞中，BrdU的特异性抗原可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。

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