荧光染料AM酯

我们实验中常用的荧光染料AM酯是易于渗透完整活细胞的疏水化合物，被广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针加载到活细胞中。非极性AM酯容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。酯化基团的水解对于分析多种细胞功能至关重要。在某些情况下（例如，钙黄绿素AM），AM酯在水解之前是无色且无荧光的。

图1.将Fluo-3 AM的原理加载到活细胞中进行细胞内Ca ²⁺检测。

AM酯类储存条件

存放在–20℃，避光。有效期为自收到之日起6个月。

AM酯溶解、储存方案

1. 准备1至10 mM的AM酯储备溶液，加入到无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液应密封保存，在-20°C下保持干燥，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。注意：AM酯容易水解，特别是在溶液中。因此，应使AM酯储备溶液尽可能地浓缩以获得佳结果。DMSO的低水含量（理想情况下≤0.1％）。
2. 非离子型洗涤剂的Pluronic ® F-127可用来增加AM酯的水溶解度。注：20％的Pluronic等体积® F-127溶液可以在加载缓冲液之前加入到DMSO储备溶液中。终的Pluronic ® F-127的浓度为约0.02％。各种Pluronic® F-127可以从百萤生物购买。不推荐在AM酯溶液中加入Pluronic® F-127后长期储存。

使用AM酯加载细胞

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的特定需求进行修改。

1. 在实验当天，将制备好的AM酯储存溶液解冻至室温。在您选择的缓冲液（例如Hanks和Hepes缓冲液）中，准备1至10 µM（可能需要更高浓度的弱荧光指示剂）的工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用AM酯的含量为（4-5 µM）。实验中必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议尝试使用较少的染料浓度来达到相对大的信号强度。
2. 如果含有有机阴离子转运的细胞，可以将丙磺舒（1-2.5 mM）或亚砜吡嗪（0.1- 0.25 mM）添加到细胞培养基中，以减少去酯化指示剂的泄漏。在室温或37°C下将细胞与AM酯孵育20分钟至一小时（弱荧光指示剂需要更长的孵育时间）。
3. 在无染料的缓冲液中洗涤细胞，以去除多余的探针。（含有有机阴离子转运的细胞洗涤时，需要适用型且包含阴离子转运蛋白抑制剂的缓冲液）。
4. 在所需的Ex / Em波长下测量荧光强度。

AM酯产品

下表总结了本公司出售的AM酯产品

表1.   紫外线激发钙指示剂

表2.   可见光激发钙指示剂

表3.   非荧光激发钙指示剂

表4.   其他离子荧光指示剂