Portelite 荧光 ssDNA 定量试剂盒 *针对 Cytocite 和 Qubit 荧光计进行了优化*

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产品优势

可准确测量初始浓度为50 pg/µL至200 ng/µL的样本，提供1–200 ng的检测范围。

适用范围

快速测量单链DNA

产品介绍

Portelite™ 荧光法单链DNA定量试剂盒专为快速测量单链DNA而设计。该试剂盒包含所有必需试剂，包括Helixyte™ Green ssDNA试剂、稀释缓冲液和预稀释DNA标准品。

Helixyte™ Green ssDNA试剂是一种灵敏的荧光核酸探针，用于定量溶液中的寡核苷酸和单链DNA（ssDNA）。只需使用提供的缓冲液稀释该试剂，加入样本（1–20 μL任意体积均可），然后使用CytoCite、Qubit®或其他手持式或台式荧光计读取浓度（Qubit®为ThermoFisher注册商标）。该检测方法可准确测量初始浓度为50 pg/µL至200 ng/µL的样本，提供1–200 ng的检测范围。

本检测适用于长链寡核苷酸或单链DNA。六碱基及以下的核苷酸和短链寡核苷酸不会干扰定量结果。核酸制备中常见的污染物（包括盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白质、核苷酸和六碱基短链寡核苷酸）对检测限无显著干扰。但双链DNA（dsDNA）和RNA会干扰检测，因为Helixyte™ Green ssDNA试剂会与dsDNA和RNA结合产生额外荧光信号

实验方案

概述

1.准备 Helixyte Green ssDNA 工作溶液
2.在每个 0.2 mL PCR 管中加入 190 µL 1X Helixyte Green ssDNA 工作溶液
3.在每个管中加入 10 µL ssDNA 标准品或测试样品
4.在室温下孵育2分钟
5.使用 CytoCite 荧光计或 Qubit 荧光计检测荧光强度

溶液制备F

Helixyte Green ssDNA 工作溶液
使用检测缓冲液（组分 B）将 Helixyte Green ssDNA 试剂（组分 A）稀释 200 倍。 例如，要为 5 个样品制备足够的工作溶液，将 5 μL Helixyte Green ssDNA（组分 A）添加到 1 mL 检测缓冲液（组分 B）中。
注意：通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得佳效果，该溶液应在稀释后几小时内使用。

操作步骤 

样品体积的可接受范围是 1~20 μL，这具体取决于核酸样品的估计浓度。
以下实验方案基于 10 µL 样品体积生成，DNA 浓度范围为 20~1000 ng /mL。
1.将 190 µL 1X Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每个 Cytocite 样品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。
注意：使用薄壁、聚丙烯、透明的 0.2 mL PCR 管，例如 AAT Cat#CCT100。
2.在每管中加入 10 µL ssDNA 标准品或测试样品，然后涡旋混合 2~3 秒。
3.在室温下孵育所有管子 2 分钟。
4.将样品插入 CytoCite 或 Qubit 并使用绿色荧光通道检测荧光。

标准校准曲线的制作
1.执行 1:2 连续稀释：将 10 ng/μL ssDNA Standard #2（组分 D）添加到检测缓冲液（组分 B）中，以获得 10、5、2.5、1.25、0.62、0.31、0.15 ng/μL DNA 标准稀释度。
2.在每个管中加入 190 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液。
3.将 10 µL 标准品加入 0.2 mL PCR 管中，然后涡旋混合 2~3 秒。
4.在室温下孵育反应 2 分钟。
5.将样品插入 CytoCite 并使用绿色荧光通道检测荧光强度。