钙离子荧光探针Mag520 AM

细胞内镁对于介导酶反应、DNA 合成、激素分泌和肌肉收缩很重要。绝大多数现有的镁离子指示剂都是基于源自流行的四羧酸盐 BAPTA 钙离子螯合剂的三羧酸盐 APTRA 螯合剂。它们包括 mag-fura-2、mag-indo-1、mag-fluo-4 和 mag-rhod-3。然而，尽管它们是为检测镁离子而设计的，但它们对钙的亲和力均高于对镁的亲和力。 Mag-520 是镁指示剂，其对镁的亲和力高于对钙的亲和力。其明显提高的选择性可用于荧光显微镜或流式细胞术的镁信号传导应用。 Mag-520 AM 具有细胞渗透性，具有与 FITC 几乎相同的光谱，使其成为与几乎所有荧光仪器普遍配备的 FITC 滤光片组一起使用的便捷荧光探针。

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实验方案

概述

1.根据需要培养细胞

2.准备 Mag-520 AM 工作溶液并将其添加到样品中

3.将样品在 37 °C 下孵育 15 至 45 分钟

4.使用带 530/30 nm 滤光片（FITC 通道）的流式细胞仪或使用带 FITC 滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度

储备溶液配制

将适量的 DMSO 添加到 Mag-520 AM 瓶中，制成 2-5 mM Mag-520 AM 储备溶液。

工作溶液配制

在您选择的缓冲液中准备 5-50 µM Mag-520™ AM 工作溶液。

注意：Mag-520 AM 工作液应立即使用。

注意：Mag-520 AM 的浓度应针对不同的细胞类型和条件进行优化。

操作步骤

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中培养细胞过夜。

2.去除处理并用您选择的缓冲液（例如 DPBS）清洗细胞。

3.添加 Mag-520 AM 工作溶液，并将样品在 37 °C 培养箱中孵育 15-45 分钟。

4.取出工作溶液并用您选择的缓冲液清洗细胞。

5.在您选择的缓冲液中重悬细胞。

6.添加刺激物刺激细胞，并使用使用 530/30 nm 滤光片（FITC 通道）的流式细胞仪或使用 FITC 滤光片组的荧光显微镜监测荧光强度。

试剂应用文献