钙离子荧光探针Fura8AM
| Ex (nm) | 354 | Em (nm) | 524 |
| 分子量 | 951.90 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
钙离子荧光探针Fura-8, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，虽然Fura-2已被广泛用作优选的激发比率钙指示剂，但它具有某些局限性，例如与单波长钙染料如Fluo-8®和Cal-520®相比灵敏度较低。AAT开发了Fura-8 以进一步Fura-2的钙响应。Fura-8的发射转换为更长的可见波长，与普通滤波器组兼容。它具有相当的钙亲和力（对Fura-2）。Fura-8 AM比Fura-2 AM对钙更敏感，信号/背景比高于Fura-2 AM。我们建议使用Ex / Em = 354 / 530nm和415 / 530nm进行比率测量，即通过监测530nm处的发射强度来计算354nm和415nm处的激发强度比。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | Fura 2 滤波片组 |
| Em： | Fura 2 滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 355, 415 nm |
| Em： | 530 nm |
| Cutoff： | 470 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底读模式/可分液处理 |
操作说明
1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Fura-8 ，AM原液。
2.1使用量的Fura-8 ，AM：1 mg
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Fura-8 TM，AM与525.27μL无水DMSO混合。
3.使用10μMFura-8 ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1终孔内浓度为Fura-8 ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的终井内浓度：0.04％
3.3终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μLFura-8 ，AM，25.6μL10％Pluronic F-127和256μL25mM丙磺舒。下一个，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Fura-8™的终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调节至以下：5μMFura-8 TM，AM，0.04％Pluronic®F-127,1mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 354/525 nm运行实验。
参考文献
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Journal: PloS one (2014): e113649
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Journal: Unknown
