Buccutite PerCP抗体标记试剂盒 标记100ug抗体

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产品优势  

高效偶联：采用优化的偶联方法，确保染料和抗体的高效结合，减少未标记抗体和过度标记的情况

 

适用范围

主要用于标记抗体 

 

产品介绍

PerCP（多甲藻黄素-叶绿素蛋白复合物）是从甲藻中分离获得的一种荧光标记物。该复合物具有极高的消光系数、高量子产率和大斯托克斯位移特性，可被488 nm氩离子激光有效激发，最大发射峰位于677 nm。AAT Bioquest推出的Buccutite™快速标记试剂盒，能够高效实现PerCP与抗体及链霉亲和素等蛋白试剂的偶联。

Buccutite™ PerCP偶联试剂盒提供了一种稳定便捷的抗体-PerCP偶联方案。试剂盒包含预活化PerCP和反应缓冲液，仅需两步简单混合即可完成标记，无需额外纯化步骤。所得偶联抗体可广泛应用于流式细胞术、Western blot、ELISA及免疫组化（IHC）等实验。每个试剂盒可完成2次标记反应，每次最多可标记100 μg抗体。针对不同抗体需通过实验确定最佳标记比例。

相较于传统SMCC偶联方法，本试剂盒具有显著优势：1. 采用预活化PerCP，可直接与蛋白氨基高效偶联，获得更高产率； 2.靶向蛋白中含量丰富的氨基基团，而SMCC方法需还原抗体再生巯基才能偶联； 3.操作流程大幅简化，省去了传统方法繁琐的活化步骤；

实验方案

1.向100 µl抗体溶液中加入5 µl反应缓冲液（组分C）

2.抗体混合液加入Buccutite™ MTA冻干粉（组分B）

3.室温孵育30分钟

4.加入50 µl Buccutite™ FOL活化PerCP（组分A）

5.室温继续孵育60分钟

 

重要保存说明：

1.试剂盒需4℃保存（有效期6个月），组分B可-20℃冻存

2.禁止冷冻组分A（活化PerCP）与组分C（反应缓冲液）

3.使用前需室温平衡所有组分，短暂离心后立即配制工作液

注：本方案以标记羊抗小鼠IgG抗体为例。

 

抗体工作液配制

抗体浓度1 mg/mL时

取100 μL抗体溶液（含100 μg抗体）加入5 μL反应缓冲液（组分C，占总反应体积5%）

 

注意事项

1.浓度调整：若抗体浓度≠1 mg/mL，需调整体积确保投入~100 μg抗体

2.抗体应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果抗体溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS，pH 7.2-7.4透析，或者使用ReadiUse™ 10KD离心过滤器（Cat. # 60502 from AAT Bioquest）去除游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）   

3.避免含BSA/明胶的抗体 

4.抗体浓度<1 mg/mL会显著降低Buccutite™ MTA反应效率

5.推荐工作浓度1-10 mg/mL

 

抗体-Buccutite™ MTA反应步骤

1.将抗体工作液直接加入Buccutite™ MTA（组分B）管中，通过反复吹吸或短暂涡旋（约5-10秒）充分混匀

2.室温（25±2℃）静置反应30-60分钟

注：可根据需求延长旋转或振荡孵育时间

 

抗体-PerCP偶联制备

1.向Buccutite™ FOL活化PerCP（组分A）管中加入50 μL超纯水（ddH₂O），吹吸或涡旋混匀至完全溶解

2.将全部复溶PerCP溶液加入抗体-MTA反应，室温旋转混合反应1小时

3.抗体-PerCP偶联物现已准备好使用

注：如需立即使用，抗体-PerCP偶联物需要稀释到您选择的缓冲液中。 

 

抗体-PerCP偶联物保存

浓度要求：≥0.5 mg/mL（需添加0.1% BSA等载体蛋白）

短期保存：4℃避光（含2 mM叠氮钠可稳定2个月）

长期保存：冻干后≤-20℃储存

 

注意事项

避免反复冻融

使用前需离心去除潜在沉淀