Buccutite 多聚HRP抗体偶联试剂盒

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产品优势

高效偶联：采用优化的偶联方法，确保染料和抗体的高效结合，减少未标记抗体和过度标记的情况

适用范围

主要用于标记抗体

产品介绍

在样本量有限或靶分子含量极低的情况下，多聚HRP抗体偶联物被视为免疫检测中灵敏度最高的检测工具。Buccutite™多聚HRP抗体偶联试剂盒专为快速制备多聚HRP标记抗体而设计。该试剂盒提供的多聚HRP已通过我们独家研发的Buccutite™ FOL连接子完成预活化。待标记抗体经试剂盒提供的Buccutite™ MTA活化后，只需将MTA活化抗体与FOL活化多聚HRP简单混合，即可获得所需的多聚HRP标记抗体偶联物。整个反应过程在极其温和的条件下进行，无需催化剂参与。

通过Buccutite™多聚HRP抗体偶联试剂盒制备的偶联物可广泛适用于ELISA、蛋白质印迹、免疫组织化学等检测中使用的显色、荧光及化学发光HRP底物。该试剂盒还可与TSA或我们研发的Styramide™荧光HRP底物联用，实现对低丰度生物靶标的超灵敏检测。

实验方案

实验方案概要

1.向抗体溶液（50 µL）中加入5 µL反应缓冲液（组分C）

2.将抗体溶液全部加入Buccutite™ MTA小瓶（组分B）中

3.室温孵育30分钟

4.加入200 µL Buccutite™ FOL活化多聚HRP（组分A）混合

5.室温孵育60分钟

重要提示

所有组分需恢复至室温，开启小瓶前请短暂离心。开始偶联前请立即配制所需溶液。以下标准操作流程以标记50 µg羊抗小鼠IgG抗体为例。

工作液配制

抗体工作液

为标记50 µg抗体（假设目标抗体浓度为1 mg/mL），请将5 µL反应缓冲液（组分C，占总体积5%）与50 µL目标抗体溶液混合。

注：若抗体浓度不同，请相应调整抗体体积，确保用于标记反应的抗体量约为50 µg/50 µL。

注：抗体应溶解于pH 7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。若抗体储存于甘氨酸缓冲液，必须先用pH 7.2-7.4的1X PBS进行透析，或使用10KD超滤管（AAT Bioquest产品号#60502）去除游离胺或铵盐（如硫酸铵、醋酸铵）。

注意：含有杂质或经牛血清白蛋白（BSA）、明胶稳定的抗体标记效果不佳。

注意：若抗体浓度低于1 mg/mL，其与Buccutite™ MTA的反应效率将显著降低。为获得最佳标记效率，推荐使用终浓度范围为1-10 mg/mL的抗体溶液。

标准实验方案

进行抗体与Buccutite™ MTA的反应

1.将抗体工作液直接加入装有Buccutite™ MTA（组分B）的小瓶中，通过反复吹吸数次或短暂涡旋振荡使其充分混合。

2.将抗体与Buccutite™ MTA的反应混合物在室温下孵育30分钟。

注意：若需要，可延长抗体与Buccutite™ MTA反应混合物的旋转或振荡时间。

制备HRP-抗体偶联物

1.将全部抗体与Buccutite™ MTA反应混合物加入装有Buccutite™ FOL活化多聚-HRP（组分A）的小瓶中，充分混匀后，在室温下孵育混合物60分钟。

注意：若需要，可延长抗体与多聚-HRP反应混合物的孵育时间。

2.此时抗体-多聚-HRP偶联物已制备完成，可供使用。

注意：若需立即使用，请使用自选缓冲液稀释该抗体-多聚-HRP偶联物。

3.偶联物浓度可按以下公式计算：

抗体浓度 (µg/µL) = 50 µg (抗体总量) / (50 µL + 5 µL + 200 µL) = 0.196 µg/µL

抗体-多聚-HRP偶联物的储存
该抗体-多聚HRP偶联物应在含有载体蛋白（如0.1%牛血清白蛋白）的条件下，于4°C避光保存，有效期可达两个月。