Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒*绿色荧光*

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产品优势

灵敏度高，可用于在单细胞水平上检测活性DNA的合成。

 

适用范围

用于细胞增殖检测

 

产品介绍

细胞增殖监测是评估细胞活力、细胞周期及遗传毒性的重要手段，其核心检测原理在于测量细胞生长S期胸苷存在时的DNA合成情况。

Bucculite™XdU细胞增殖检测试剂盒采用XdU标记物，在DNA合成过程中整合至细胞DNA链。细胞固定后，通过特异性标记技术使掺入的XdU与iFluor® 488MTA结合，最终形成的iFluor® 488标记DNA可通过FITC通道进行流式检测。

Bucculite™XdU细胞增殖检测试剂盒为抗BrdU抗体的检测方法和EdU点击化学反应提供了创新替代方案，具有灵敏度高的特点，可在单细胞水平精准测量DNA合成活性

 

样品实验方案

概述

1.准备细胞样本（96孔板每孔100 µL，384孔板每孔25 µL）

2.加入2X XdU工作液（96孔板每孔100 µL）

3.37°C孵育3小时

4.移除培养基，每孔加入100 µL冰预冷90%甲醇/PBS固定液，室温固定15分钟

5.移除固定液，用PBS清洗三次

6.加入1X iFluor™ 488-MTA工作液（每孔100 µL），室温避光染色30分钟

7.移除工作液，用1X洗涤缓冲液清洗细胞三次

8.每孔加入100 µL 1X洗涤缓冲液，使用FITC滤光片组进行荧光显微镜观察

细胞制备

细胞样本制备指南请参阅：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

储备液配制
除非另有说明，所有未使用的储备液应分装为单次使用量，制备后保存于-20°C，避免反复冻融。

XdU储备液（1000X）：

向XdU（组分A）中加入500 µL DMSO（组分E），配制1000X储备液

注：该1000X浓度经HeLa细胞优化确定。生长培养基、细胞密度、细胞类型差异等因素可能影响标记效果，建议测试不同XdU浓度以确定最佳条件

iFluor™ 488-MTA储备液（400X）：

向iFluor™488-MTA（组分B）中加入50 µL DMSO（组分E），配制400X储备液

 

工作液配制

2X XdU工作液：

取1000X XdU储备液，用完全培养基稀释500倍，制备2X工作液

1X iFluor™ 488-MTA工作液：
取2.5 µL 400X iFluor™488-MTA储备液，加入1 mL染色缓冲液（组分C），制备1X工作液

1X洗涤缓冲液：

取1 mL 10X洗涤缓冲液（组分D），加入9 mL PBS，制备1X工作液

 

细胞制备：

贴壁细胞：在生长培养基中过夜铺板（96孔板每孔10,000-40,000细胞/100 µL；384孔板每孔2,500-10,000细胞/20 µL）

悬浮细胞：从培养基中离心收集细胞，重悬细胞沉淀至1-2×10⁶细胞/mL（每块96孔板需10 mL）
注：每种细胞系需单独评估确定合适细胞密度

 

XdU标记

1.向细胞培养基中等体积加入2X XdU工作液，使每孔终浓度为1X。不建议完全更换培养基，以免影响细胞增殖速率。

2.在细胞合适培养条件下孵育3小时。XdU暴露时间可直接反映DNA合成活性，具体时间取决于细胞生长速率

 

细胞固定

孵育后移除培养基，每孔加入100 µL冰预冷90%甲醇/PBS溶液（v/v=90/10，需自备），室温固定15分钟
移除固定液，每孔用PBS清洗两次

 

细胞染色：

1.每孔加入100 µL（96孔板）或50 µL（384孔板）1X iFluor™ 488-MTA工作液，室温避光孵育30分钟
移除工作液

2.用1X洗涤缓冲液清洗三次，清洗后每孔加入100 µL洗涤缓冲液

注：如需Hoechst 33342复染，用1X洗涤缓冲液配制5-10 µg/mL Hoechst 33342溶液，染色30分钟

3.使用FITC滤光片组观察细胞荧光信号