Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒*绿色荧光*

检测细胞增殖是评估细胞活力、细胞周期和遗传毒性的可靠方法之一。检测细胞增殖的一种基本方法是在细胞生长的S期过程中，在存在胸腺嘧啶核苷的情况下测量DNA合成。Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒使用XdU，该XdU在DNA合成过程中被掺入细胞DNA中。固定细胞后，将掺入的XdU用iFluor 488叠氮化物标记。在FITC观察荧光标记的DNA。Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒是抗BrdU抗体的检测和EdU点击化学检测的替代品。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒。 

样品实验方案

概述

准备细胞
使用XdU工作溶液处理细胞3小时
固定细胞
透化细胞
用Bucculite 工作溶液处理细胞30分钟
使用FITC滤波片组在荧光显微镜下观察

 

准备细胞

1.对于贴壁细胞，过夜生长的平板细胞在96孔板中为10,000至40,000个细胞/孔/100μL，在384孔板中为2,500至10,000个细胞/孔/20μL

2.对于非贴壁细胞，离心培养细胞，然后以1-2 X 10⁶细胞/ mL（对于96孔板为10mL）悬浮细胞颗粒。

 

溶液配制

1.储备溶液配制

1.1 XdU储备溶液（100X）
将XdU（组分A）溶于200 µL DMSO中制成XdU储备溶液。
注意：可以将剩余的XdU储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.2iFluor 488叠氮化物储备溶液（200 X）
将iFluor 488叠氮化物（组分B）溶于100 µL DMSO中，制成iFluor 488叠氮化物储备溶液。
注意：可以将剩余的iFluor 488叠氮化物储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.3XdU反应添加剂储备溶液（20X）
将XdU反应添加剂（组分E）溶于1 mL去离子水中，制成XdU反应添加剂储备溶液。
注意：剩余的XdU反应添加剂储备溶液可以在-20°C下保存。

 

2.工作溶液配制

2.1XdU工作溶液配制
在1 mL细胞培养基中加入10 µL 100X XdU储备溶液，制成XdU工作溶液。
注意：1 mL的工作溶液足以进行5次检测。
注意：此100X浓度是使用优化的XdU浓度在HeLa和Jurkat细胞中测试的。 生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。 我们建议检测一系列XdU浓度，以确定佳浓度以及是否适合您的细胞等因素。

2.2Bucculite 工作溶液
按以下顺序混合并充分涡旋
①905 µL染色缓冲液（组分C）
②40 µL CuSO4（组分D）
③5 µL iFluor 488叠氮化物储备溶液
④50 µL XdU反应添加剂储备溶液
注意：1 mL的Bucculite 工作溶液足以进行5次检测。

 

操作步骤

1.用XdU标记细胞
将等体积的XdU工作溶液添加到细胞中。
在佳条件下，将细胞孵育3小时。 XdU在细胞中的时间可以直接检测细胞DNA的合成。 孵育时间取决于细胞生长速率。

 

2.细胞固定
孵育后，除去培养基，并用PBS洗涤细胞一次。
向每个试管中加入100 µL的固定缓冲液（含3.7%甲醛的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育15-20分钟。
除去固定液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

 

3.细胞通透性处理
向每个试管中加入100 µL透化缓冲液（0.5％Triton®X-100的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育10-20分钟。
除去通透缓冲液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

 

4.细胞染色
在试管中加入100 µL Bucculite 工作溶液。 在室温避光下，将Bucculite 工作溶液在室温下孵育细胞30分钟。
除去每个管中的Bucculite 工作溶液。
用PBS洗涤细胞两次，洗涤后加入200 µL PBS。
在荧光显微镜中使用FITC滤光片观察细胞中的荧光信号。

 

图示

图1.使用Buccutite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒（Cat＃22326）检测到的S期HeLa细胞图像。