Amplite 马来酰亚胺定量试剂盒(荧光法)绿色荧光

Amplite 马来酰亚胺定量试剂盒(荧光法)绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于胺定量的试剂盒，具有马来酰亚胺基团的各种交联剂广泛用于将蛋白质与蛋白质或蛋白质交联至其他生物分子。 很少有试剂或检测试剂盒可用于定量引入一种蛋白质的马来酰亚胺基团的数量。 所有市场出售的试剂盒都有繁琐的操作。 我们的试剂盒使用专有染料，与马来酰亚胺反应后荧光增强。 该试剂盒提供灵敏的一步荧光测定方法，可在100μL测定体积（浓度100 nM）下检测少至10皮摩尔的马来酰亚胺。 该测定快速稳定。 它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 该试剂盒提供了所有必需试剂的便捷方案。 为了快速定量蛋白质马来酰亚胺基团，我们建议您使用＃5526。 对于纳米粒子马来酰亚胺基团的定量，我们建议您使用＃5525。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 马来酰亚胺定量试剂盒。 

样品实验方案

简要概述

1.准备20X马来酰亚胺反应混合物（260μL）
2.在室温下孵育30-60分钟
3.准备马来酰亚胺工作溶液（50μL）
4.添加N-乙基马来酰亚胺标准品或测试样品（50μL）
5.在室温下孵育5至30分钟
6.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加（截止= 515 nm）

 

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1马来酰亚胺Green 原液（500X）：
将20μLDMSO（组分E）加入到马来酰亚胺Green（组分A）的小瓶中以制备500X马来酰亚胺Green 储备溶液。 注意：10μL的500X马来酰亚胺Green 原液足以容纳一个96孔板。

 

2.标准溶液配制

点击查看N-乙基酰亚胺标准溶液配制方案
将10μL10mM（10nmol /μL）N-乙基马来酰亚胺标准品（组分D）加入990μL测定缓冲液（组分C）中以产生100μM（100pmol /μL）N-乙基马来酰亚胺标准溶液（MS7）。 取100μM（10pmol /μL）N-乙基酰亚胺标准溶液（MS7）并进行1：3连续稀释，得到用测定缓冲液（组分C）连续稀释的N-乙基马来酰亚胺标准品（MS6-MS1）。

 

3.工作溶液配制

3.1将10μL500X马来酰亚胺Green 储备溶液加入250μL反应缓冲液（组分B）中并充分混合以制备20X马来酰亚胺反应混合物。 在室温下孵育20X马来酰亚胺反应混合物至少30分钟，避光。 注意：将20X马来酰亚胺反应混合物孵育至少30分钟以使信号与背景比最大化非常重要。 注意：将500X马来酰亚胺Green 储备液加入反应缓冲液（组分B）后，溶液呈黄色。

3.2将整瓶20X马来酰亚胺反应混合物加入5mL测定缓冲液（组分C）中并充分混合以制备马来酰亚胺工作溶液。 注意：此马来酰亚胺工作溶液不稳定，随用随配。

 

操作步骤

 

表1.实心黑色96孔微孔板中N-乙基马来酰亚胺标准品和测试样品的布局

MS = N-乙基马来酰亚胺标准品（MS1-MS7,0.14至100μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
MS1	MS1	...	...
MS2	MS2	...	...
MS3	MS3
MS4	MS4
MS5	MS5
MS6	MS6
MS7	MS7

 

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50 µL	连续稀释液（0.14至100μM）
BL	50 µL	分析缓冲液
TS	50 µL	测试样品

 

1.根据表1和2中提供的布局制备N-乙基马来酰亚胺标准品（MS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向每个N-乙基马来酰亚胺标准孔，空白对照和测试样品中加入50μL马来酰亚胺工作溶液，使总马来酰亚胺测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL马来酰亚胺工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应5至30分钟，避光。 注意：为获得最佳效果，由于荧光背景随时间增加，应在30分钟内读取荧光强度。

4.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下监测荧光增加。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算N-乙基马来酰亚胺样品。 点击使用在线线性回归计算器。

图1.使用NOVOstar酶标仪（BMG Labtech），在具有Amplite 荧光马来酰亚胺定量测定试剂盒的96孔板（黑色）中测量N-乙基马来酰亚胺剂量响应。

 

参考文献

Conjugation with an inulin-chitosan adjuvant markedly improves the immunogenicity of Mycobacterium tuberculosis CFP10-TB10. 4 fusion protein
Authors: Weili Yu, Tao Hu
Journal: Molecular Pharmaceutics (2016)

Moderate PEGylation of the carrier protein improves the polysaccharide-specific immunogenicity of meningococcal group A polysaccharide conjugate vaccine
Authors: Tingting Zhang, Weili Yu, Yanfei Wang, Tao Hu
Journal: Vaccine (2015): 3208--3214

Rapid quantification of maleimide in bioconjuated samples using a novel colorimetric method (TECH2P. 761)
Authors: Jinfang Liao, Haitao Guo, Zhen Luo, Qin Zhao, Jack Diwu
Journal: The Journal of Immunology (2015): 206--7

Successful acquisition of a neutralizing monoclonal antibody against a novel neutrophil-activating peptide, mitocryptide-1
Authors: Tatsuya Hattori, Kenta Nakashima, Takayuki Marutani, Yoshiaki Kiso, Yoshisuke Nishi, Hidehito Mukai
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 54--59

CD133-targeted paclitaxel delivery inhibits local tumor recurrence in a mouse model of breast cancer
Authors: Suresh Kumar Swaminathan, Emilie Roger, Udaya Toti, Lin Niu, John R Ohlfest, Jayanth Panyam
Journal: Journal of Controlled Release (2013): 280--287

PEG as a spacer arm markedly increases the immunogenicity of meningococcal group Y polysaccharide conjugate vaccine
Authors: Qingrui Huang, Dongxia Li, Aijun Kang, Wenqi An, Bei Fan, Xiaowei Ma, Guanghui Ma, Zhiguo Su, Tao Hu
Journal: Journal of Controlled Release (2013): 382--389

 

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