Buccutite 过氧化物酶（HRP）抗体偶联试剂盒 适合标记1mg蛋白

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产品优势  

高效偶联：采用优化的偶联方法，确保染料和抗体的高效结合，减少未标记抗体和过度标记的情况

 

适用范围

主要用于标记抗体 

 

产品介绍

蛋白质偶联通常采用双功能交联剂（如常用的SMCC），其两端分别具有不同反应活性以实现两种蛋白质的连接。交联剂一端通过NHS酯与蛋白质中赖氨酸的氨基（-NH2）或N末端反应，另一端则通过马来酰亚胺与半胱氨酸的巯基（-SH）结合。然而，SMCC修饰的蛋白质极不稳定且易发生自身交联，因为蛋白质分子往往同时含有氨基和巯基，导致严重的同源交联现象。此外，准确量化蛋白质上的马来酰亚胺基团数量也相当困难且繁琐。

Buccutite™过氧化物酶（HRP）抗体偶联试剂盒专为含游离氨基的蛋白质、多肽及其他配体与辣根过氧化物酶（HRP）的直接偶联而设计。本试剂盒提供的HRP已通过专利Buccutite™ FOL连接子预活化，可直接用于偶联反应。在温和的中性条件下，Buccutite™ FOL活化的HRP能与含Buccutite™ MTA的分子高效反应，且无需任何催化剂。相比传统的SMCC等技术，Buccutite™生物偶联系统具有显著优势：操作更简便、稳定性更强，可实现生物分子的快速定量偶联，并获得更高的偶联效率和产物得率。

实验方案 

1.如果抗体浓度为5 mg/mL，在抗体溶液（200 µL）中加入10 µL反应缓冲液（成分C）。

2.向Buccutite™ MTA小瓶中加入10 µL DMSO以配制Buccutite™ MTA工作溶液

3.向抗体溶液中加入4.5 µL Buccutite™ MTA储备液

4.在室温下培养30分钟

5.加入500 µL H₂O 重新溶解 Buccutite™ FOL-活化的 HRP (组分 A)

6.将Buccutite™ MTA激活抗体溶液与500 µL Buccutite™ FOL-活化的HRP（成分A）混合

7.在室温下培养60分钟

 

重要保存说明：

1.试剂盒需4℃保存（有效期6个月），组分B可-20℃冻存

2.禁止冷冻组分A（活化HRP）与组分C（反应缓冲液）

3.使用前需室温平衡所有组分，短暂离心后立即配制工作液

注：本方案以标记羊抗小鼠IgG抗体为例。

 

抗体工作液配制

抗体浓度5 mg/mL时

取200 μL抗体溶液加入10 μL反应缓冲液（组分C），如果您的抗体不是5mg/mL，请加入反应缓冲液（成分C）总量的5%。

 

注意事项

1.浓度调整：该方案假定目标抗体浓度为5 mg/mL。如果抗体浓度低于1 mg/mL，抗体-Buccutite™ MTA反应效率会显著降低。为了获得最佳标记效率，建议抗体浓度范围为1-5 mg/mL

2.抗体应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果抗体溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS，pH 7.2-7.4透析，或者使用ReadiUse™ 10KD离心过滤器（Cat. # 60502 from AAT Bioquest）去除游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）   

3.避免含BSA/明胶的抗体 

 

Buccutite™ MTA工作液配制

向Buccutite™ MTA（组分B）的小瓶中加入10 µLDMSO（DMSO,本品未提供）。

注意：这种储备液应尽快使用。

 

抗体-Buccutite™ MTA反应步骤

1.将抗体工作液直接加入Buccutite™ MTA（组分B）管中，通过反复吹吸或短暂涡旋充分混匀

2.室温静置反应30-60分钟

注：可根据需求延长旋转或振荡孵育时间

 

抗体-HRP偶联制备

1.向Buccutite™ FOL活化HRP（组分A）管中加入500 μL超纯水（ddH₂O），吹吸或涡旋混匀至完全溶解

2.将全部复溶HRP溶液加入抗体-MTA反应，室温旋转混合反应1小时

3.抗体-HRP偶联物现已准备好使用

可选：HRP-抗体结合物可以通过分子筛层析进一步纯化，以获得更好的性能。

注：或者，将抗体-Buccutite™ MTA溶液混合物直接加入Buccutite™ FOL-活化的HRP小瓶中。

 

抗体-HRP偶联物保存

浓度要求：≥0.5 mg/mL（需添加0.1% BSA等载体蛋白）

短期保存：4℃避光（含2 mM叠氮钠可稳定2个月）

长期保存：冻干后≤-20℃储存

 

注意事项

避免反复冻融

使用前需离心去除潜在沉淀