iFluor 647 酪胺（iFluor 647 Styramide） * Alexa Fluor 647酪胺的优异替代品*
| Ex (nm) | 656 | Em (nm) | 670 |
| 分子量 | 1231.63 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
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产品货期： 咨询 |
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适用范围： 该产品适合标记抗体或蛋白。应用于细胞或组织。 |
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产品优势： 1.荧光信号更强； 2.灵敏度更高； 3.是Tyramide的替代品。 |
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产品简介： iFluor 647酪胺（iFluor 647 Styramide），是一种用于荧光信号放大的产品，它通过HRP和过氧化氢催化，标记到抗体上。 |
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注意事项： 1.该产品不能进行活体成像。 2.100slides：一管试剂足够100个玻片使用。 |
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| 查看光谱 | |
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适用仪器： |
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| 荧光显微镜 | |
| Ex: | Cy5滤波片组 |
| Em： | Cy5滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 滤波片： | Cy5滤波片组 |
样品实验方案
简要概述
- 修复/透化细胞或组织
- 在封闭缓冲液中添加一抗
- 加入HRP标记的二抗
- 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）
溶液配制
储备溶液配制
1.Styramide 储备溶液（100X）
将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。
注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，避免重复冻融。
2.H2O2储备溶液
将90 µL的ddH2O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。
注意：在使用当天新配制的100X H2O2溶液，做到现用现配。
工作溶液配制
1.Styramide 工作溶液（1X）
每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H2O2储备溶液。
注意：1.按照每个盖玻片或96孔板中的每孔需要100µL Styramide工作溶液来计算，可以进行100次测试。
2.必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。
2.二抗-HRP工作溶液
根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二抗-HRP工作溶液。
实验步骤
（该步骤适用于细胞或组织染色）
细胞固定和透化
1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。
2.用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。
4.用PBS冲洗细胞或组织两次。
组织固定，脱石蜡和补液
（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）
过氧化物酶标记
1.可选：在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟，淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。
2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。
3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。
4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。
5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。
6.将100 µL二抗-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。
7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。
Styramide标记
1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。
2.用PBS冲洗3次。
复染和荧光成像
1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂说明进行操作。
2.加上盖玻片。
3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。
表1.建议用于核复染色的产品。
| 货号 | 产品名称 | Ex/Em(nm) |
| 17548 | 核蓝 DCS1 | 350/461 |
| 17550 | 核绿 DCS1 | 503/526 |
| 17551 | 核橙 DCS1 | 528/576 |
| 17552 | 核红 DCS1 | 642/660 |
图示
 图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。 |
 图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。 |
参考文献
Authors: Mustary, Umme Habiba and Maeno, Akiteru and Rahaman, Md Mostafizur and Ali, Md Hasan and Tokumoto, Toshinobu
Journal: Scientific Reports (2024): 24354
Authors: Matsuki, Takuma and Hirose, Takuo and Ohsaki, Yusuke and Shimada, Satoshi and Endo, Akari and Ito, Hiroki and Takahashi, Chika and Yamakoshi, Seiko and Oba-Yabana, Ikuko and Anan, Go and others,
Journal: Journal of hypertension (2022): 1935--1949
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| 名称
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激发（nm）
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发射（nm）
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消光系数（cm -1 M -1）
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量子产率
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