Screen Quest 比色法氯离子通道检测试剂盒
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
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适用范围
用于检测氯离子通道活性
产品介绍
氯离子通道在多种重要生理和细胞功能中发挥关键作用，包括调节pH值、维持容量稳态、有机溶质转运、细胞迁移、增殖与分化等。这类通道具有重要的药物靶点价值——囊性纤维化、巴特综合征等慢性疾病均与氯离子通道功能缺陷相关。然而，现有氯通道调节剂筛选技术往往难以兼顾通量、灵敏度与生理相关性。
Screen Quest™ 比色法氯离子通道检测试剂盒提供了一种高灵敏度、高稳定性的比色检测方案。该技术基于专利碘化物指示剂（Iodide Blue™），可检测低至30 nM的碘离子浓度，为氯通道研究提供优化方法。本检测兼容96孔或384孔微孔板形式，并能轻松实现自动化操作。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收: | 630, 380, or 405nm |
| 推荐孔板: | 透明底板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备细胞
2.除去生长培养基
3.加入加入碘负载缓冲液，用待筛化合物处理细胞
4.用DPBS缓冲液洗涤细胞3次
5.用1X裂解液裂解细胞
6.添加等体积的I-sensor（50或25 µL）
7.将0.1X加到I- Sensor Enhancer（50或25 µL）
8.在室温下孵育10秒至10分钟
9检测380 nm，405 nm或630 nm处的吸光度
细胞样本制备指南详见：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
溶液配制
注：所有未使用的储备溶液应分装为单次用量，配制后于-20°C保存，避免反复冻融
储备溶液配制
细胞裂解缓冲液（1X）
将10X细胞裂解液（组分D）整瓶加入45 mL无菌水中混匀。
注意：5 mL 1X细胞裂解缓冲液可满足一块板需求。未使用的1X裂解液需4°C保存
工作溶液配制
碘传感器增强剂（1X）
将50 µL 100X碘传感器增强剂（组分B）加入5 mL无菌水中混匀
注意：1. 1X增强剂溶液不稳定，稀释后需2小时内使用
2.不同细胞系需优化增强剂稀释浓度（某些细胞系使用0.1X效果更好）
实验步骤
碘化物流出测定
1.吸弃细胞板中的生长培养基
2.加入预热的碘负载缓冲液（组分C）（96孔板100 µL/孔，384孔板25 µL/孔），孵育2-4小时
3.彻底吸弃负载缓冲液，用DPBS或HBSS洗涤细胞≥3次
4.用含激动剂的HBSS缓冲液处理细胞5分钟
注意：拮抗剂筛选时：需在DPBS/HBSS洗涤前先用含化合物的负载缓冲液预处理≥30分钟
5.吸弃上清
6.加入1X裂解液裂解细胞（96孔板50 µL/孔，384孔板25 µL/孔）
7.进行碘化物测定。
碘内流检测
1.吸弃细胞板中的生长培养基
2.加入含测试化合物的预热碘负载缓冲液（组分C）（96孔板100 µL/孔，384孔板25 µL/孔），孵育5分钟
3.彻底吸弃负载缓冲液，用HBSS洗涤3次
4.加入1X裂解液裂解细胞（体积同上）
5.进行碘检测
碘检测
1.向完成内流/外流检测的孔中加入Iodide Blue™传感器（组分A）（体积同上）
2.加入1X碘传感器增强剂（体积同上）
注意：某些细胞系需将增强剂稀释至0.1X
3.室温孵育10秒-10分钟
注意：1.合适的孵育时间需根据细胞系优化
2.高浓度碘离子会使蓝色溶液在数秒至分钟内变黄
4.监测630 nm、380 nm或405 nm处吸光度
试剂应用文献
Circular RNA APP contributes to Alzheimer’s disease pathogenesis by modulating microglial polarization via miR-1906/CLIC1 axis
Authors: Wu, Deng-Pan and Wei, Yan-Su and Hou, Li-Xiang and Du, Yu-Xuan and Yan, Qiu-Qing and Liu, Ling-Ling and Zhao, Yuan-Dan and Yan, Ru-Yu and Yu, Chao and Zhong, Zhen-Guo and others,
Journal: Alzheimer's Research \& Therapy (2025): 1--17
