Cell Meter 2-NBDG 葡萄糖摄取检测试剂盒
| Ex (nm) | 467 | Em (nm) | 538 |
| 分子量 | N/A | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
2-NBDG 葡萄糖摄取检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测葡萄糖的试剂盒，葡萄糖代谢是将葡萄糖转化为能量的过程，是大多数生物体中能量供应的主要来源。 2-NBDG [2-（N-（7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-基）氨基）-2-脱氧葡萄糖]，一种荧光标记的葡萄糖示踪剂，已被证明可有效监测葡萄糖转运在细胞中，2-NBDG通过与葡萄糖相同的葡萄糖转运蛋白（GLUT）转运到细胞中。一旦2-NBDG在细胞中被摄取，它就在C-6位置发生磷酸化，得到2-NBDG-6-磷酸，它很好地保留在细胞内。与其他葡萄糖示踪剂（例如2-DG或FDG）相比，2-NBDG允许在单细胞水平上具有高时间和空间分辨率的2-NBDG的原位测量。 AAT Bioquest的Cell Meter 2-NBDG葡萄糖摄取分析试剂盒提供灵敏的非放射性分析，用于测量培养细胞中的葡萄糖摄取。在该试剂盒中，分析缓冲液I用于增强细胞中2-NBDG的摄取和保留，而分析缓冲液II可以细胞中2-NBDG的信号背景比。可以通过荧光显微镜或具有FITC滤波片组的流式细胞仪检测荧光信号。 Cell Meter 2-NBDG葡萄糖摄取分析试剂盒是检测葡萄糖转运蛋白的强大工具。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的2-NBDG 葡萄糖摄取检测试剂盒。
适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| Ex: | 488 nm |
| Em： | 530/30 nm |
| 通道: | FITC通道 |
荧光显微镜 |
|
| Ex: | FITC 滤波片组 |
| Em： | FITC 滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
样品实验方案
简要概述
1.用您的测试化合物准备细胞
2.加入2-NBDG染色溶液
3.将细胞在37ºC孵育20分钟
4.去除2-NBDG染色溶液
5.用测定缓冲液I洗涤细胞
6.使用荧光显微镜或具有FITC滤波器/通道的流式细胞仪分析细胞
工作溶液配制
将5μL的2-NBDG（10mg / mL）（组分A）加入1.5mL的测定缓冲液I（组分B）中并充分混合以制备2-NBDG染色溶液。 避光。 注意：该2-NBDG染色溶液在室温下稳定1小时。 由于染色条件可能根据不同的细胞类型而变化，因此建议确定每个特定实验的组分A的浓度。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。
操作步骤
1.将测试化合物加入细胞中并在37℃，5％CO2培养箱中孵育所需的一段时间（例如24,48或96小时）。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定细胞密度和孵育时间。我们将CHO-K1细胞与20mM葡萄糖一起孵育用于葡萄糖竞争测定，并将100μMPhloretin用于GLUT抑制测定。
2.在处理结束时，在实验前将制动器以800rpm离心5分钟。
3.在不干扰细胞的情况下吸出上清液。
4.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的2-NBDG染色溶液。注意：需要确定每个细胞系和每个特定实验的孵育时间。我们将CHO-K1细胞在37℃下与100μM2-NBDG（~34μg/ mL）孵育20分钟以显示足够的葡萄糖摄取。
5.在孵育结束时，将板以800rpm离心5分钟。
6.去除2-NBDG染色溶液，不干扰细胞。
7.对于荧光显微镜：用测定缓冲液I（组分B）洗涤细胞一次。将细胞保持在100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的测定缓冲液II（组分C）中。使用带有FITC过滤器的荧光显微镜监测荧光信号。
8.对于流式细胞仪：如果需要，使用EDTA分离细胞，并在100μL/样品分析缓冲液I（组分B）中重悬细胞。使用带有FITC通道的流式细胞仪监测荧光信号。
数据分析
| 图1.使用Cell Meter 2-NBDG葡萄糖摄取测定试剂盒在CHO-K1细胞中摄取2-NBDG的荧光图像。将40,000个细胞/孔/100μL的CHO-K1细胞在96孔黑色壁/透明底板中接种过夜。将细胞用20mM葡萄糖（B）或100μMPhloretin（C）在37℃处理1小时，然后与100μM2-NBDG染色溶液一起温育20分钟。 未处理的对照细胞在相同条件下染色。使用具有FITC滤光器的荧光显微镜测量荧光信号。 |
参考文献
NT1014, a novel biguanide, inhibits ovarian cancer growth in vitro and in vivo
Authors: Lu Zhang, Jianjun Han, Amanda L Jackson, Leslie N Clark, Joshua Kilgore, Hui Guo, Nick Livingston, Kenneth Batchelor, Yajie Yin, Timothy P Gilliam
Journal: Journal of Hematology & Oncology (2016): 91
Glutamine promotes ovarian cancer cell proliferation through the mTOR/S6 pathway
Authors: Lingqin Yuan, Xiugui Sheng, Adam K Willson, Dario R Roque, Jessica E Stine, Hui Guo, Hannah M Jones, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Endocrine-related cancer (2015): 577--591
