Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒 绿色荧光
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞自噬检测的试剂盒，这种Cell Meter 自噬试剂盒采用Autophagy Green 作为特异性自噬体标志物来分析自噬的活性。该分析针对直接检测分离和附着的细胞中的自噬进行了优化。该试剂盒提供了测定方案的所有必需组分。 Cell Meter 自噬试剂盒适用于荧光显微镜，荧光酶标仪和流式细胞仪。 Autophagy Green 具有Ex / Em = 447/553 nm的大斯托克斯位移。自噬是一种进化上保守的降解过程，其靶向长寿命蛋白质，细胞器和其他细胞质成分以通过溶酶体途径降解。自噬途径与通常降解短寿命蛋白质的遍在蛋白 - 蛋白酶体途径的作用是互补的。自噬途径的对于多种细胞作用是必需的，包括饥饿期间的存活，细胞内成分，发育和免疫。在没有压力的情况下，自噬起到一种管家功能，去除受损害的细胞器和细胞成分，防止细胞毒性作用。就癌症发展而言，自噬似乎扮演多重角色。某些自噬蛋白如Beclin-1和Bif-1的表达减少或缺失会增加小鼠的肿瘤易感性，而这些蛋白的过度表达可抑制癌细胞生长。然而，自体吞噬对于癌细胞在实体瘤的营养缺乏和缺氧核心中的存活至关重要。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒。
适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| Ex: | 488 nm |
| Em： | 530/30 nm |
| 通道: | FITC通道 |
|
荧光显微镜 |
|
| Ex: | FITC 滤波片组 |
| Em： | FITC 滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
|
荧光酶标仪 |
|
| Ex: | 485 nm |
| Em： | 530 nm |
| Cutoff： | 515 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式： | 底部读取模式 |
样品实验方案
简要概述
1.用您的测试化合物准备细胞
2.添加Autophagy Green 工作溶液
3.在37°C孵育15-60分钟
4.用洗涤缓冲液洗涤细胞
5.监测Ex / Em = 485 / 530nm处的荧光增加（截止= 515nm），使用FITC滤光片组的荧光显微镜或使用Ex / Em = 485 / 530nm通道的流式细胞仪
工作溶液配制
将20μL的Autophagy Green （组分A）加入10 mL染色缓冲液（组分B）中并充分混合以制备Autophagy Green 工作溶液。 避光。 注意：对于一个96孔板，20μL的500X Autophagy Green （组分A）就足够了。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。
操作步骤
1.根据您的特异性诱导方案（约1-2×104个细胞/孔/ 96孔板）将细胞培养至适于自噬诱导的密度。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。
2.去除培养基。
3.向每个孔中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Autophagy Green 工作溶液。
4.将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育15至60分钟。注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
5.用洗涤缓冲液（组分C）洗涤细胞3-4次，然后向每个孔中加入100μL洗涤缓冲液（组分C）。注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。
6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 485 / 530nm（截止= 515nm），具有FITC滤光器组的荧光显微镜或具有Ex / Em = 485 / 530nm通道的流式细胞仪监测荧光强度。
数据分析
>图1.自噬Green 标记的囊泡是由HeLa细胞中的饥饿诱导的。 将HeLa细胞在常规DMEM培养基（左：对照）或含有5％血清的1X HBSS缓冲液（右：自噬处理）中孵育16小时。 将对照和饥饿细胞与Autophagy Green 工作溶液一起在37℃，5％CO 2培养箱中孵育20分钟，然后用洗涤缓冲液洗涤3次。 在具有FITC通道（绿色）的荧光显微镜下立即对细胞成像。 细胞核用Hoechst 33342（蓝色）染色。
参考文献
Coronarin D induces apoptotic cell death through the JNK pathway in human hepatocellular carcinoma
Authors: Hui-Wen Lin, Ming-Ju Hsieh, Chao-Bin Yeh, Kuan-Chun Hsueh, Yi-Hsien Hsieh, Shun-Fa Yang
Journal: Environmental toxicology (2018)
Methods for Measuring Autophagy Levels in Disease
Authors: Kanchan Phadwal, Dominic Kurian
Journal: (2017): 195--211
High glucose induces bone marrow-derived mesenchymal stem cell senescence by upregulating autophagy
Authors: Tzu-Ching Chang, Min-Fen Hsu, Kenneth K Wu
Journal: PloS one (2015): e0126537
Licochalcone A induces autophagy through PI3K/Akt/mTOR inactivation and autophagy suppression enhances Licochalcone A-induced apoptosis of human cervical cancer cells
Authors: Jen-Pi Tsai, Chien-Hsing Lee, Tsung-Ho Ying, Chu-Liang Lin, Chia-Liang Lin, Jung-Tsung Hsueh, Yi-Hsien Hsieh
Journal: Oncotarget (2015): 28851
相关产品
| 产品名称 | 货号 |
| Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒 蓝色荧光 | Cat#23000 |
