活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ROS的试剂盒，活性氧（ROS）是氧正常代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起重要作用。ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管疾病，糖尿病，骨质疏松症，中风，炎性疾病，许多神经退行性疾病和癌症中的作用已得到公认。ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒使用我们专有的ROS Brite 670探针来定量活细胞中的ROS。与ROS反应后，可渗透细胞且无荧光的ROS Brite 670表现出很强的荧光信号。ROS Brite 670探针位于细胞质中。ROS Brite 670探针的荧光信号可以通过荧光显微镜，高含量成像，荧光酶标仪或流式细胞仪进行测量。Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在孵育1小时内检测活细胞中的细胞内ROS（尤其是超氧化物和羟基自由基）。可以使用荧光酶标仪或带有Cy5滤光片的荧光显微镜以方便的96孔或384孔板进行检测。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。
活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全
适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| Ex: | 640 nm |
| Em： | 660/20 nm |
| 通道: | APC 通道 |
|
荧光显微镜 |
|
| Ex: | Cy5 滤波片组 |
| Em： | Cy5 滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
|
荧光酶标仪 |
|
| Ex: | 650 nm |
| Em： | 675 nm |
| Cutoff： | 665 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式： | 底读模式 |
样品实验方案
简要概述
适用于荧光酶标仪、荧光显微镜
1.在生长培养基中制备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.添加ROS Brite 670工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）
4.将细胞在37℃下染色30-60分钟
5.在Ex / Em = 650/675 nm（截止= 665 nm）或使用TRITC滤光片组的荧光显微镜下检测荧光（底部读取模式）
适用于流式细胞仪
1.在生长培养基中制备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.将ROS Brite 670与细胞一起孵育30-60分钟
4.使用具有FL4通道的流式细胞仪监测荧光强度
溶液配制
1.储备溶液配制
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. ROS Brite 670原液（500X）：
将40μLDMSO（组分C）加入到ROS Brite 670（组分A）的小瓶中并充分混合以制备500X ROS Brite 670储备溶液。 避光。 注意：20μL的500X ROS Brite 670原液足以容纳1个平板。对于流式细胞仪，为方便起见，可将5倍ROS Brite 670储备液稀释5倍至DMSO中。为了存放，请将管子紧紧密封。
2.工作溶液配制
将20μL500XROS Brite 670储备溶液加入10 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成ROS Brite 670工作溶液。 注意：此ROS Brite 670工作溶液在室温下稳定至少2小时。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。
操作步骤
（适用于荧光酶标仪、荧光显微镜）
1.用10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384孔板）在所需缓冲液（如PBS或HHBS）中处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。
2.为了诱导ROS，将细胞板在室温下或在5％CO2,37℃培养箱中孵育一段时间（例如：用100μM叔丁基过氧化氢（TBHP）处理Hela细胞30分钟）。
3.向细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的ROS Brite 670工作溶液。
4.将细胞在5％CO2,37℃培养箱中孵育30分钟至60分钟。
5.使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 650 / 675nm（截止值= 665nm）检测荧光增加，或使用具有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞。
（适用于流式细胞仪）
1.以5×105至1×106个细胞/ mL的密度制备细胞。 注意：应根据个体评估每个细胞系，以确定诱导细胞凋亡的细胞密度。
2.用所需缓冲液（如PBS或HHBS）处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。
3.为诱导ROS，将细胞板在室温或5％CO2,37°C培养箱中孵育至少30分钟（用100μM叔丁基过氧化氢（TBHP）处理的Hela细胞30分钟）。
4.将1μL/ mL细胞的500X ROS Brite 670储备溶液或5μL/ mL细胞的100X ROS Brite 670储备溶液加入细胞培养基中。
注：1µL/mL 表示每毫升细胞培养基中添加的ROS Brite 670储备液体积为1微升。这个浓度是相对于细胞培养基的总体积而言的，因此也可以说是在每升细胞培养基中添加1毫升ROS Brite 670储备液。这种浓度通常用于细胞实验中，以使得实验物质与细胞有良好的相互作用，同时不会对细胞造成太大的毒性影响。该浓度仅为初学者进行指导，请根据自己的实际情况，调整浓度，优化自己的实验。
5.将细胞在5％CO2,37℃培养箱中孵育30至60分钟。
6.使用具有FL4通道的流式细胞仪检测荧光强度。
数据分析
| 图1.使用Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒检测HeLa细胞中的ROS。 将HeLa细胞以15,000个细胞/90μL/孔接种在Costar黑色孔板中过夜。 未处理细胞（对照）或用1mM H2O2或100μM叔丁基过氧化氢（TBHP）在37℃处理30分钟。 加入ROS Brite 670工作溶液（100μL/孔）并在5％CO2,37℃培养箱中温育1小时。 使用FlexStation（Molecular Devices）在底部读取模式下在Ex / Em = 650 / 675nm（截止值= 665nm）下检测荧光信号。 |
参考文献
Anti-proliferation effect of blue light-emitting diodes against antibiotic-resistant Helicobacter pylori
Authors: Jianwei Ma, Takahiro Hiratsuka, Tsuyoshi Etoh, Junko Akada, Hajime Fujishima, Norio Shiraishi, Yoshio Yamaoka, Masafumi Inomata
Journal: Journal of Gastroenterology and Hepatology (2017)
Notoginsenoside R1 attenuates high glucose-induced endothelial damage in rat retinal capillary endothelial cells by modulating the intracellular redox state
Authors: Chunlan Fan, Yuan Qiao, Minke Tang
Journal: Drug Design, Development and Therapy (2017): 3343
Good hydration and cell-biological performances of superparamagnetic calcium phosphate cement with concentration-dependent osteogenesis and angiogenesis induced by ferric iron
Authors: J Zhang, HS Shi, JQ Liu, T Yu, ZH Shen, JD Ye
Journal: Journal of Materials Chemistry B (2015): 8782--8795
Topiramate Protects Pericytes from Glucotoxicity: Role for Mitochondrial CA VA in Cerebromicrovascular Disease in Diabetes
Authors: Ping Patrick, Tulin O Price, Ana L Diogo, Nader Sheibani, William A Banks, Gul N Shah
Journal: Journal of endocrinology and diabetes (2015)
Down-regulated peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) in lung epithelial cells promotes a PPARγ agonist-reversible proinflammatory phenotype in chronic obstructive pulmonary disease (COPD)
Authors: Sowmya P Lakshmi, Aravind T Reddy, Yingze Zhang, Frank C Sciurba, Rama K Mallampalli, Steven R Duncan, Raju C Reddy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2014): 6383--6393
Superoxide dismutase as a target of clioquinol-induced neurotoxicity
Authors: Kazuyuki Kawamura, Yukiko Kuroda, Masako Sogo, Miki Fujimoto, Toshio Inui, Takao Mitsui
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2014): 181--185
Xanthine oxidase inhibition by febuxostat attenuates experimental atherosclerosis in mice
Authors: Johji Nomura, Nathalie Busso, Annette Ives, Chieko Matsui, Syunsuke Tsujimoto, Takashi Shirakura, Mizuho Tamura, Tsunefumi Kobayashi, Alexander So, Yoshihiro Yamanaka
Journal: Scientific reports (2014): 4554
High glucose-induced mitochondrial respiration and reactive oxygen species in mouse cerebral pericytes is reversed by pharmacological inhibition of mitochondrial carbonic anhydrases: implications for cerebral microvascular disease in diabetes
Authors: Gul N Shah, Yoichi Morofuji, William A Banks, Tulin O Price
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2013): 354--358
Measure intracellular reactive oxygen species using far-red fluorescence
Authors: Hoang Ha
Journal: Unknown
相关产品
| 产品名称 | 货号 |
| Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 绿色荧光 | Cat#22900 |
| Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 红色荧光 | Cat#22901 |
| Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 适合于流式细胞仪 | Cat#22904 |
