Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合流式细胞检测

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的细胞凋亡检测试剂盒，我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来监测细胞凋亡。在凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标，可以在观察到形态变化之前进行检测。该试剂盒使用与PS特异性结合的荧光膜联蛋白V。已经证明膜联蛋白V缀合物选择性结合PS，使用带有FITC通道的流式细胞仪（绿色荧光）优化了此特定的检测试剂盒，以检测细胞凋亡。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒。

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流式细胞仪
Ex:	488 nm
Em：	530/30 nm
通道:	FITC 通道

样品实验方案

简要概述

用测试化合物（200μL/样品）制备细胞
添加Annexin V-iFluor 488原液
在室温下孵育30-60分钟
使用FL1通道的流式细胞仪分析细胞（Ex / Em = 490/525 nm）

 

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段时间（用喜树碱处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。注意：膜粘附细胞的膜联蛋白V流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。和van Engelend等人。

2.离心细胞，得到1-5×10⁵个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液（组分B）中。

4.将2μL膜联蛋白V-iFluor 488（组分A）加入细胞中。

5.可选：加入2μL100X碘化丙啶（成分C）用于坏死细胞。

6.在室温下孵育30至60分钟，避光。

7.可选：在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加200至300μL的测定缓冲液（组分B）以增加体积。

8.使用具有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490 / 525nm）监测膜联蛋白V-iFluor 488的荧光强度。当碘化丙啶加入细胞时，使用FL2通道测量细胞活力。

 

数据分析

        在活的非凋亡细胞中，膜联蛋白V-iFluor 488检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，膜联蛋白V-iFluor 488与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上，因此导致染色强度增加。

图1.检测膜联蛋白V-iFluor 488和磷脂酰丝氨酸在Jurkat细胞中的结合活性。 Jurkat细胞在37℃，5％CO2培养箱中不用（蓝色）或用20μM喜树碱（红色）处理4-5小时，然后用Annexin V-iFluor 488染色30分钟。 使用FL1通道用FACSCalibur（Becton Dickinson）流式细胞仪测量膜联蛋白V-iFluor 488的荧光强度。

 

参考文献

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