Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光

Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 *蓝色荧光* 是通过测量Caspase 9的活性而用于细胞凋亡检测的。Caspase 9是CED-3亚家族中的一员。活化的Caspase 9能切割下游caspases,例如caspase-3,-6和-7，起始Caspase级联反应。在正常发育的神经系统中，活化的Caspase 9是凋亡所必需的。Caspase 9具有底物的选择性，其识别底物基序为Leu-Glu-His-Asp (LEHD)。本试剂盒利用Ac-LEHD-ProRed 作为荧光指示器来检测caspas-9的活性。通过caspas-9的切割ProRed 产生强蓝色荧光，EX/Em = 350/450 nm。这种特性使得试剂盒能适合于DAPI滤光器。本试剂盒提供所有必需组分。该实验稳定、快速且适应高通量筛选的需求。它不仅能够定量凋亡细胞中caspas-9的活性还能筛选caspas-9的抑制剂。很多实验室利用本试剂盒进行高通量抑制剂的筛选。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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荧光酶标仪
Ex:	450 nm
Em：	620 nm
Cutoff：	610 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	顶部/底部读取

样本实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室温下孵育1小时
4.在Ex / Em = 535/620 nm（截止= 610 nm）监测荧光强度（顶部或底部读取模式）

 

工作溶液配制

将5μL的200X Ac-LEHD-ProRed 储备溶液（组分A）加入1mL的分析缓冲液（组分B）中并充分混合以制备Caspase 9工作溶液。 避光。 注意：Caspase 9工作液不稳定，请及时使用。 1 mL Caspase 9工作溶液足以进行10次分析。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

 

操作步骤

1.通过将10μL/孔的10X测试化合物（96孔板）或5μL/孔的5X测试化合物（384-板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在37℃，5％CO₂，培养箱中孵育所需的一段时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞3-4小时）以诱导细胞凋亡。

3.添加100μL/孔/ 96孔或25μL/孔/ 384孔板的Caspase 9工作溶液。

4.将板在室温下孵育至少1小时，避光。注意：如果需要，在室温下加入Caspase 9工作溶液10分钟前，向选定的样品中加入1μL的1 mM Ac-LEHD-CHO caspase 9抑制剂，以确认抑制caspase 9样活性。

5.在Ex / Em = 540 / 620nm（cutoff= 610nm）下用荧光酶标仪（顶部或底部读取模式）监测荧光强度。注意：有时，底部读数会提供更好的信号背景比。如果使用底部读取模式，则以800rpm离心细胞板（特别是对于非贴壁细胞）2分钟 。

 

数据分析

图1.使用Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒检测Jurkat细胞中的Caspase 9活性 红色荧光 。 将Jurkat细胞在同以300,000个细胞/90μL/孔接种在Costar黑色壁/透明底96孔板中。 用或不用1μM星形孢菌素处理细胞4小时。 加入半胱天冬酶9工作溶液（100μL/孔）并在室温下温育1小时。 使用FlexStation荧光酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em = 540 / 620nm（截止值= 610nm）下测量荧光强度。

 

参考文献

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