Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光
| Ex (nm) | 341 | Em (nm) | 441 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡检测的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 *蓝色荧光* 是通过测量Caspase 8的活性而用于细胞凋亡检测的。Caspase 8 是一种Caspase蛋白，CASP8基因所编码。在神经元变性疾病中，例如亨廷顿综合症，caspase 8扮演着重要角色。Caspase 8已被证明具有底物选择性，其肽基序为Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。该试剂盒使用(Ac-IETD)2-AMC作为荧光指示器来检测caspas-8的活性。通过caspas-8的切割AMC肽产生强蓝色荧光（eX/eM = 350/450 NM）。这种特性使得试剂盒能适合于DAPI滤光器。本试剂盒提供所有必需组分和操作流程。该实验结果稳定，快速且适应高通量筛选。它不仅能够定量凋亡细胞中caspas-8的活性还能筛选caspas-8的抑制剂。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 370 nm |
| Em： | 450 nm |
| Cutoff： | 420 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 顶/底读模式 |
样品实验方案
简要概述
1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.监测Ex / Em = 370/450 nm处的荧光增加（截止= 420 nm）
工作溶液配制
将50μLCaspase8底物（组分A）加入10mL测定缓冲液（组分B）中并充分混合以制备Caspase 8工作溶液。 避光。 注意：Caspase 8工作液不稳定，请及时使用。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。
操作步骤
1.通过将10μL/孔的10X测试化合物（96孔板）或5μL/孔的5X测试化合物（384孔板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。
2.将细胞板在5％CO 2,37℃培养箱中孵育所需的一段时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。
3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 8工作溶液。
4.将Caspase 8工作溶液板在室温下孵育30至60分钟，避光。注意：如果需要，在室温下加入Caspase 8工作溶液10分钟前，向选定的样品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制剂，以确认对caspase 8样活性的抑制作用。
5.以800rpm离心细胞板（特别是对于非贴壁细胞）2分钟（制动关闭）。
6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 370 / 450nm（截止= 420nm）下监测荧光增加。
数据分析
| 图1.使用Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒检测Jurkat细胞中的caspase 8活性*蓝色荧光*。 在Costar黑壁/透明底96孔板中以相同的以200,000个细胞/90μL/孔接种Jurkat细胞。 用或不用1μM星形孢菌素处理细胞5小时。 加入半胱天冬酶8工作溶液（100μL/孔）并在室温下温育30分钟。 使用FlexStation 酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em = 370 / 450nm（截止值= 420nm）下测量荧光强度。 |
参考文献
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