Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞凋亡的试剂盒，我们的 Cell Meter 检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该特殊试剂盒旨在通过测量 Caspase 3 的激活来监测细胞凋亡。 Caspase 3 被广泛认为是细胞凋亡的可靠指标，因为 caspase-3 (CPP32/apopain) 的激活对于细胞凋亡的启动非常重要。 Caspase 3 对肽序列 Asp-Glu-Val-Asp (DEVD) 具有底物选择性。该试剂盒使用 Z-DEVD-Rh 110-DVED-Z 作为 caspase-3 活性的荧光指示剂。 Caspase 3 裂解 Rh 110 肽会产生强荧光 Rh 110，在 480-500 nm 激发下，在 520-530 nm 处进行荧光监测。该试剂盒提供了所有必要的组件以及优化的检测方案。该测定是稳定的，并且可以很容易地适应高通量测定。该试剂盒采用 96 孔格式，每孔使用 100 uL 试剂，提供足够的试剂来进行 200 次测定。该试剂盒采用 384 孔格式，每孔使用 25 uL 试剂，提供足够的试剂来进行 800 次测定。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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荧光酶标仪
Ex:	490 nm
Em：	525 nm
Cutoff：	515 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	顶/底读模式

样本实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 3/7工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光强度（截止= 515 nm）

 

工作溶液配制

将 50 µL Caspase 3/7 底物（组分 A）添加到 10 mL 测定缓冲液（组分 B）中，并充分混合，制成 Caspase 3/7 底物工作溶液。 注意：将未使用的 Caspase 3/7 底物（组分 A）和测定缓冲液（组分 B）等分并储存在 -20 oC 下。避免重复冷冻/解冻循环

 

细胞制备

1.对于贴壁细胞：将细胞在生长培养基中过夜，96 孔板为 20,000 个细胞/孔/90 uL，384 孔板为 5,000 个细胞/孔/20 mL。

2.对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮在培养基中，对于 96 孔聚 D 赖氨酸板，细胞沉淀为 80,000 个细胞/孔/90 uL，对于 96 孔聚 D 赖氨酸板，细胞沉淀为 20,000 个细胞/孔/20 uL 384 孔聚 D 赖氨酸板。实验前关闭刹车，将板以 800 rpm 离心 2 分钟。 注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导凋亡的最佳细胞密度。

 

操作

1.通过将10μL/孔的10X测试化合物（96孔板）或5μL/孔的5X测试化合物（384孔板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在37℃，5％CO₂，培养箱中孵育所需的一段时间（对于用喜树碱处理的Jurkat细胞，4-6小时）以诱导细胞凋亡。

3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 3/7工作溶液。

4.将板在室温下孵育至少1小时，避光。注意：如果需要，在室温下加入Caspase 3/7工作溶液10分钟后，将1μL1mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂加入到选定的样品中，以确认抑制半胱天冬酶3/7样活动。

5.以800rpm离心细胞板（特别是对于非贴壁细胞）2分钟（制动关闭）。

6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下监测荧光强度。

 

数据分析

图1. Jurkat细胞中半胱天冬酶3/7活性的检测。 Jurkat细胞在以80,000个细胞/孔/90μL接种在黑色壁/透明底96孔板中。 用或不用20μM喜树碱处理细胞5小时，和/或用5μM半胱天冬酶3/7抑制剂AC-DEVD-CHO处理细胞10分钟。 加入半胱天冬酶3/7工作溶液（100μL/孔）并在室温下温育1小时。 使用NOVOstar仪器（BMG Labtech）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止值= 515nm）下测量荧光强度。

 

 

参考文献

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