钙黄绿素, AM CAS 148504-34-1

钙黄绿素, AM是美国AAT Bioquest生产的用于钙离子定量的试剂，与钙黄绿素相比，钙黄绿素 AM 具有增强的疏水性，因此它很容易穿过活细胞的细胞膜。钙黄绿素 (calcein AM) 的乙酰甲氧基 (AM) 衍生物广泛用于标记活细胞，因为它可以通过细胞膜转运到活细胞中。 AM酯基掩盖了螯合钙的分子部分。在转运到活细胞中后，细胞酯酶切断 AM 基团，分子与细胞内的钙结合（产生强烈的绿色荧光），并被保留在细胞内。由于死细胞缺乏酯酶，因此只有活细胞被标记。此功能使其对于测试细胞活力和短期标记细胞非常有用。与其他活细胞标记试剂（如 BCECF-AM 和羧基荧光素二乙酸酯）相比，calcein-AM 是适合用于染色活细胞的荧光探针，因为它的细胞毒性低。钙黄绿素不会显着影响细胞功能，例如淋巴细胞的增殖或趋化性。此外，使用钙黄绿素的活力测定是可靠的，并且与标准的 51Cr 释放测定具有良好的相关性。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙黄绿素，AM。

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选择指南

使用细胞活力指标AM酯类

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性将各种极性荧光探针加载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们在溶液中易于水解。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）溶解。 DMSO储备溶液可以在20℃下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯可以稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5mM AM酯的储备溶液。非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加AM酯的水溶性。

注意：在稀释到上样缓冲液中之前，可将等体积的20％Pluronic®F-127溶液添加到细胞活力指示剂的DMSO储备溶液中。终的Pluronic®F-127浓度约为0.02％。

注意：不建议长期储存含有Pluronic®F-127的AM酯。

b）在实验当天，要么将细胞活力的固体指示剂溶解在DMSO中，要么将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度范围为4至5μM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37℃下将细胞与AM酯孵育20分钟至1小时。

d）在不含细胞活力指示剂的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂）中洗涤细胞以除去过量的探针。

注意：通过流式细胞术立即分析细胞样品，以保证每个细胞的平均荧光。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验 。

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