PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒 *蓝色*

PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测磷酸盐的试剂盒，磷酸盐参与许多生物反应。例如，磷酸酶，ATP酶和几种其他酶催化无机磷酸盐（Pi）从底物释放的反应。 这种PhosphoWorks 磷酸盐检测试剂盒是为测量任何产生磷的酶的活性而开发的。 该试剂盒的配方可灵敏检测Pi，为危险的放射性方法和其他灵敏度较低的比色分析提供了替代方案。 Pi的测量基于在钼酸盐存在下孔雀石绿衍生物的吸光度变化。 与其他孔雀石染料配方不同，该试剂盒可提供完全稳定的终点信号，不易沉淀。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的PhosphoWorks 比色法磷酸盐检测试剂盒。 

操作步骤

简要概述

准备测试样品或磷酸盐标准品（80μL）
添加MG Plus 试剂（组分B）（20μL）
在室温下孵育10-40分钟
监测600-660nm的吸光度或分光光度计

 

制备标准溶液

磷酸盐标准配制

在950μL去离子水或酶反应缓冲液中加入50μL1mM磷酸盐标准品（组分A），得到50μM磷酸盐标准溶液（PS7）。 取50μM磷酸盐标准溶液（PS7）并进行1：2连续稀释，用去离子水或酶反应缓冲液获得连续稀释的磷酸盐标准品（PS6-PS1）。

 

样品实验方案

 

表1.透明96孔微孔板中磷酸盐标准品和测试样品的布局。

PS =磷酸盐标准品（PS1-PS7,0.78至50μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
PS1	PS1	...	...
PS2	PS2	...	...
PS3	PS3
PS4	PS4
PS5	PS5
PS6	PS6
PS7	PS7

 

表2.每个孔的试剂组成。

孔	规格	试剂
PS1-PS7	80ul	连续稀释液（0.78至50μM）
BL	80ul	不含磷酸盐的水或缓冲液
TS	80ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备磷酸盐标准品（PS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用40μL试剂代替80μL。

2.使用前摇匀MG Plus 试剂（组分B）。

3.向磷酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入20μLMGPlus™试剂（组分B），使总磷酸盐测定体积为100μL/孔。彻底混合试剂。对于384孔板，在每个孔中加入10μLMGPlus™试剂（组分B），总体积为50μL/孔。

4.在含磷酸盐的孔中将在10至40分钟内产生蓝绿色。使用吸光度酶标仪在600 - 660 nm处监测吸光度或使用分光光度计。注意：在高磷酸盐浓度（>100μM）下，可能会形成沉淀。稀释样品并重新进行分析。注意：对于需要总体积大于100μL的比色皿测定，在测量吸收之前，将样品体积和MG Plus 试剂（组分B）按比例加倍或用1M H 2 SO 4或1M HCl稀释最终反应混合物。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（吸光度）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算磷酸盐样品。 我们建议使用在线线性回归计算器（点击查看）

图1.使用SpectraMax Plus酶标仪（Molecular Devices），在透明的96孔板上用PhosphoWorks 比色磷酸盐测定试剂盒测量磷酸盐剂量响应。

 

参考文献

Modulating bone regeneration in rabbit condyle defects with three surface-structured tricalcium phosphate ceramics
Authors: Rongquan Duan, Davide Barbieri, Florence de. groot, Joost de. bruijn, Huipin Yuan
Journal: ACS Biomaterials Science & Engineering (2018)

Variation of bone forming ability with the physicochemical properties of calcium phosphate bone substitutes
Authors: Rongquan Duan, Davide Barbieri, Xiaoman Luo, Jie Weng, Chongyun Bao, Joost De Bruijn, Huipin Yuan
Journal: Biomaterials Science (2017)

Influence of surface microstructure and chemistry on osteoinduction and osteoclastogenesis by biphasic calcium phosphate discs.
Authors: NL Davison, J Su, H Yuan, JJJP van den Beucken, JD de Bruijn
Journal: (2015)

Submicron-scale surface architecture of tricalcium phosphate directs osteogenesis in vitro and in vivo
Authors: NL Davison, X Luo, T Schoenmaker, V Everts, H Yuan, F Barrere-de Groot, JD de Bruijn
Journal: Eur Cell Mater (2014)

Zinc in calcium phosphate mediates bone induction: in vitro and in vivo model
Authors: Xiaoman Luo, Davide Barbieri, Noel Davison, Yonggang Yan, Joost D de Bruijn, Huipin Yuan
Journal: Acta biomaterialia (2014): 477--485

 

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