PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒，三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量，代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。它被称为细胞内能量转移的“货币分子单位”，以驱动活细胞中的许多过程和化学合成。 ATP也是细胞通讯的信号分子，在DNA和RNA合成中起重要作用。 AAT Bioquest提供了多种生物发光测定试剂盒，可通过重组萤火虫荧光素酶（目录号21610和21609）确定ATP的纳摩尔（nM）范围。这些试剂盒需要酶标仪，通常用于细胞活力或细胞毒性测定。 PhosphoWorks 荧光ATP分析试剂盒基于一系列ATP诱导的酶偶联反应，产生过氧化氢，该过氧化氢用我们的Amplite Red底物通过分光光度法定量。该测定法可在100 µL反应体积中检测到约0.4 µM ATP，而不受ADP和AMP的干扰。它为测定生物样品中的ATP水平提供了一种强大，简单且方便的测定方法。 PhosphoWorks 荧光ATP分析是我们基于荧光素酶的ATP分析试剂盒的补充。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的PhosphoWorks 荧光ATP检测试剂盒。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 540 nm |
| Em： | 590 nm |
| Cutoff： | 570 nm |
| 推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备ATP工作溶液（50 µL）
2.添加ATP标准液或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光增加
溶液配制
1.制备储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1Amplite 红色底物储备液（200X）：
将30 µL DMSO（组分E）加入小瓶Amplite Red Substrate（组分A）中，制成200X Amplite Red Substrate储备液。
1.2ATP标准溶液（10mM）：
将0.5 mL的ddH2O加入到ATP标准溶液（组分D）的小瓶中，制成10 mM ATP标准溶液。
2.制备标准溶液
ATP标准
将10 µL的10 mM ATP标准溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中，以生成100 µM ATP标准溶液（AS7）。 取100 µM ATP标准溶液（AS7）并进行1：3连续稀释，以使用1X PBS缓冲液获得系列稀释的ATP标准溶液（AS6-AS1）。
3.制备工作溶液
3.1将5毫升测定缓冲液（组分C）添加到酶混合瓶（组分B）中，并充分混合。
3.2在Enzyme Mix瓶中加入25 µL 200X AmpliteTM Red Substrate储备液，充分混合以制成APT工作溶液。
样品示例及操作
表1.黑色96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 AS = ATP标准品（AS1-AS7，0.14至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| AS1 | AS1 | ... | ... |
| AS2 | AS2 | ... | ... |
| AS3 | AS3 | ||
| AS4 | AS4 | ||
| AS5 | AS5 | ||
| AS6 | AS6 | ||
| AS7 | AS7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| AS1-AS7 | 50ul | 连续稀释（0.14至100 µM） |
| BL | 50ul | 1 X PBS缓冲液 |
| TS | 50ul | 测试样品 |
1.根据表1和2中提供的布局，准备ATP标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。
2.将50 µL ATP工作溶液添加到ATP标准液，空白对照和测试样品的每个孔中，以使ATP总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL ATP工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。
3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。
4.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）处监视荧光增加。
参考文献
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