钙离子荧光探针Rhod-FF, AM

钙测量对于许多生物学研究至关重要。结合 Ca2+ 后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够通过使用荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离 Ca2+ 浓度的变化。 Rhod-FF AM 具有细胞渗透性，在细胞内经酯酶水解后生成 Rhod-FF。 Rhod-FF 对 Ca2+ 的结合亲和力较低，适用于 10 至 200 uM 的 Ca2+ 测量。与Rhod-2 指示剂一样，Rhod-FF 在没有二价阳离子的情况下基本上不发出荧光，并且在结合 Ca2+ 时表现出荧光，且没有光谱偏移。

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溶解方案(溶剂以说明书为准)

实验方案

储备溶液配制

在高质量无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Rhod-FF AM 储备溶液。

工作溶液配制

Rhod-FF AM工作溶液
1.实验当天，将 Rhod-FF AM 溶解在 DMSO 中或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。

2.在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Rhod-FF AM 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Rhod-FF AM。细胞加载所需指示剂的准确浓度必须根据经验确定。

注：非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Rhod-FF AM 的水溶性。可以从百萤购买各种 Pluronic® F-127 解决方案。
注：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后探针的泄漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从百萤购买。

操作步骤

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中培养细胞过夜。
2.第二天，将 1X Rhod-FF AM 工作溶液添加到细胞板中。
注意：如果您的化合物干扰血清，请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。
3.将载有染料的板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。
注：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。
4.用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒）代替染料工作溶液，以去除任何多余的探针。
5.根据需要添加刺激剂，并使用配备 Indo-1 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（如 FlexStation）的荧光酶标仪同时测量荧光

试剂应用文献

参考文献